抗犬瘟熱和犬細(xì)小病毒病二聯(lián)卵黃抗體的制備及其臨床治療效果觀察.pdf

1、犬瘟熱病毒(CDV)和犬細(xì)小病毒(CPV)均能引起犬的高度接觸性、致死性傳染病,是世界各地常見的犬只病毒性疾病。犬瘟熱常表現(xiàn)為雙相體溫升高、急性鼻卡他和隨后的支氣管炎、卡他性肺炎、嚴(yán)重胃腸炎和神經(jīng)癥狀；犬細(xì)小病毒病常表現(xiàn)為腸炎綜合征,少數(shù)呈現(xiàn)心肌炎綜合征。臨床上常用特異性的高免血清和單克隆抗體對(duì)犬瘟熱和犬細(xì)小病毒病進(jìn)行防治,卵黃抗體較高免血清和單克隆抗體有生產(chǎn)成本低、操作簡(jiǎn)便、可大量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。目前有應(yīng)用卵黃抗體治療犬的報(bào)道,然而臨床上

2、應(yīng)用的卵黃抗體滴度較低,治療效果不太理想。本試驗(yàn)試圖通過制備組織滅活苗免疫蛋雞,以提高卵黃抗體滴度,并進(jìn)行臨床治療效果觀察,為以后卵黃抗體在犬病的治療上提供科學(xué)依據(jù)。
　　 試驗(yàn)1:首先將本實(shí)驗(yàn)室保存的CDV、CPV毒株作為毒種,分別接種于非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero細(xì)胞)、貓腎細(xì)胞(F81細(xì)胞),進(jìn)行病毒的培養(yǎng)擴(kuò)增,當(dāng)80％以上細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)后收集細(xì)胞及培養(yǎng)液；然后用所培養(yǎng)病毒對(duì)健康犬進(jìn)行攻毒,使其出現(xiàn)臨床癥狀并死

3、亡后,取犬的內(nèi)臟進(jìn)行勻漿、離心,最后按常規(guī)的甲醛法滅活組織勻漿液,以蜂膠為免疫佐劑,制備CDV/CPV二聯(lián)組織滅活苗。
　　 試驗(yàn)2:將本試驗(yàn)制備的犬瘟熱和犬細(xì)小病毒二聯(lián)組織滅活苗和二聯(lián)細(xì)胞毒滅活苗給正處于產(chǎn)蛋期的40周齡蛋雞分別進(jìn)行免疫,然后對(duì)兩種方法所收集的雞蛋中的抗體進(jìn)行效價(jià)的測(cè)定和對(duì)比,確定比較好的蛋雞免疫方法。試驗(yàn)分為3組,每組10只蛋雞。A組:注射的疫苗為組織滅活苗；免疫方法為頸部、胸部、翼部和腿部多位點(diǎn)肌肉注射；免

4、疫時(shí)間:第1 d、第8 d、第22 d、第30 d。B組:免疫方法和免疫時(shí)間均和A組一致,不同的是注射的疫苗為細(xì)胞毒滅活苗。C組為對(duì)照組,注射生理鹽水,免疫方法和免疫時(shí)間均和A組一致。在第四次免疫后,每隔兩天收集雞蛋,直到第50 d。利用PEG6000二步沉淀法從收集的雞蛋中分離和提取卵黃抗體(IgY),然后采用體外病毒中和試驗(yàn)和間接Elisa方法測(cè)定卵黃抗體的效價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果顯示:A組所得抗體的效價(jià)明顯高于B組,并且A組抗體達(dá)到峰值的所

5、需時(shí)間較B組短；試驗(yàn)證明采用組織滅活苗制備卵黃抗體的方法比傳統(tǒng)的制備卵黃抗體的方法好。
　　 試驗(yàn)3:首先把卵黃抗體做成口服膠囊型制劑；然后選取臨床上自然感染犬瘟熱的發(fā)病犬20條和自然感染犬細(xì)小病毒病的犬20條；把患有犬瘟熱的犬和患有犬細(xì)小病毒病的犬分別分成兩組:試驗(yàn)組和對(duì)照組,每組10條犬;對(duì)照組按照常規(guī)的治療方法進(jìn)行治療,試驗(yàn)組按照常規(guī)治療方法進(jìn)行治療的同時(shí)飼喂卵黃抗體膠囊；最后測(cè)定兩組犬的治愈率和治愈時(shí)間。試驗(yàn)結(jié)果顯示:試