圈養(yǎng)野生動物腸球菌耐藥分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:調(diào)查圈養(yǎng)野生動物的動物源性(動物園、熊貓館)、環(huán)境源性(動物園里的水樣、土樣)以及人源性(動物園的飼養(yǎng)員、獸醫(yī)及普通人群)高水平耐氨基糖苷類腸球菌、耐萬古霉素腸球菌的耐藥性,并對分離出的耐藥菌株進(jìn)行耐藥表型、基因型檢測及同源性研究,為指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理用藥及控制耐藥性傳播提供理論依據(jù)。
　　 方法:采用瓊脂平板篩選法(ADSP法)篩選高水平慶大霉素腸球菌(HLGRE)、高水平耐鏈霉素腸球菌(HLSRE)、耐萬古霉素腸球菌(V

2、RE);根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法測定耐藥菌株對6種抗菌藥物的耐藥性;用PCR法對分離出的不同來源的高水平耐氨基糖苷類腸球菌進(jìn)行菌種的鑒定及耐慶大霉素腸球菌主要耐藥基因的檢測;采用多重PCR法對不同來源的耐萬古霉素腸球菌在進(jìn)行耐藥基因檢測的同時(shí)進(jìn)行種水平的鑒定;用重復(fù)基因外回文序列-聚合酶鏈反應(yīng)(REP-PCR)對篩選出的部分高水平耐慶大霉素腸球、耐萬古霉素腸球菌進(jìn)行基因分型及同源性分析。
　　

3、 結(jié)果:
　　 (1)從動物園(圈養(yǎng)野生動物、水樣和土樣、飼養(yǎng)員、獸醫(yī))、熊貓館(熊貓)及普通人群共283個(gè)樣本中篩選出165株HLGRE、39株VIE。從動物園(部分圈養(yǎng)野生動物、飼養(yǎng)員、獸醫(yī))、熊貓館(熊貓)及普通人群共74份樣本中篩選出38株HLSRE。不同來源的分離率不同:其中動物源性高水平耐慶大霉素腸球菌、高水平耐鏈霉素腸球菌的分離率最高,分別占65.92％、64.86％,但普通人群的高水平耐慶大霉素腸球菌、高水平耐鏈

4、霉素腸球菌檢出率僅分別為23.81％、19.05％,而耐萬古霉素腸球菌的分離率存在較大的差異,為0％~37.5％,且均為中介菌。藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不同來源的高水平耐氨基糖苷類腸球菌、耐萬古霉素腸球菌均以紅霉素和土霉素的耐藥率最高,以氨芐西林的耐藥率最低。其中高水平耐氨基糖苷類腸球菌中,屎腸球菌的耐藥性高于糞腸球菌。
　　 (2)PCR法檢測高水平耐慶大霉素耐藥基因:不同來源的165株高水平耐慶大霉素腸球菌中,aac(6')-Ie

5、-aph(2")-Ia基因的陽性率為88.48％(146/165)。其中在篩選出的高水平耐慶大霉素腸球菌中,圈養(yǎng)野生動物動物源性、環(huán)境源性、人源性的aac(6')-Ie-aph(2')-Ia基因陽性率分別為88.98％(105/118)、84.37％(27/32)、93.33％(14/15)。均未擴(kuò)增出aph(2")-Ib:aph(2")-Ic;aph(2")-Id基因。多重PCR法檢測耐萬古霉素耐藥基因:26株動物源性的耐萬古霉素腸球

6、菌中,2株VanB型腸球菌,9株VanC1型腸球菌,12株VanC1/C2型腸球菌,未擴(kuò)增出VanA型腸球菌,3株基因型不明:7株環(huán)境源性的耐萬古霉素腸球菌中,2株VanB型腸球菌,1株VanC1型腸球菌,3株VanC1/C2型腸球菌,未擴(kuò)增出VanA型腸球菌,1株基因型不明;6株人源性耐萬古霉素腸球菌中,4株VanB型腸球菌,2株VanC1型腸球菌,未擴(kuò)增出VanA、VanC1/C2型腸球菌。
　　 (3)REP-PCR結(jié)果顯

7、示,不同來源的高水平耐慶大霉素腸球菌、耐萬古霉素腸球菌可分為2-3個(gè)型,不同的型又可分為2~4個(gè)亞型。同源性結(jié)果分析顯示,在不同來源的高水平耐慶大霉素腸球菌中,有6組分別具有100％的同源性,包括分離自熊貓館的5、8:動物園肉食動物的1、4;動物園爬行兩棲類動物的2、4、5;普通人群的7、11;動物園飼養(yǎng)員的5和8,6和7。在不同來源的耐萬古霉素腸球菌中,分離自動物園環(huán)境的2和3,1、8和9及分離自動物園不同動物的4和7,14和15,1

8、、3和10具有100％同源性。
　　 結(jié)論:
　　 (1)不同來源的腸球菌對氨基糖苷類高水平耐藥十分普遍,大多數(shù)腸球菌對高濃度慶大霉素耐藥由aac(6')-Ie-aph(2")-Ia基因介導(dǎo),且屎腸球菌的耐藥性明顯高于糞腸球菌。耐萬古霉素腸球菌的檢出率較高,但圈養(yǎng)野生動物(動物源性、環(huán)境源性)主要由VanC介導(dǎo),人源性主要由VanB介導(dǎo),耐藥表型與基因型一致。分離的耐藥菌對紅霉素、土霉素耐藥率最高,而對環(huán)氨芐西林的耐藥率

9、最低。
　　 (2)同源性分析顯示:圈養(yǎng)野生動物(動物源性、環(huán)境源性)的HLGRE、VIE在同種群的動物之間、不同種群的動物之間、不同的環(huán)境之間都存在同源性為100％的菌株,且飼養(yǎng)員之間、普通人群之間也存在這種現(xiàn)象?？紤]到圈養(yǎng)野生動物的特殊性以及不同人群可能存在直接或間接的接觸,說明可能存在不同水平的水平傳播或克隆傳播。
　　 (3)對圈養(yǎng)野生動物(動物源性、環(huán)境源性)及人源性(飼養(yǎng)員、獸醫(yī)、普通人群)高水平耐氨基糖苷類