鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備及初步應用.pdf

1、山東農業(yè)大學碩士學位論文鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備及初步應用姓名：楊萍萍申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：崔言順20040612山東農業(yè)大學碩士學位論文鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備及初步應用摘要鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒(DHV)引起的一種主要發(fā)生于3周齡以下雛鴨的傳播迅速、高度致死性的傳染病。本課題對鴨肝炎病毒在雞鴨胚、雞胚成纖維細胞和雞胚肝細胞上的生長繁殖進行了研究，制備了純度較高的DHV抗原，以此免疫BALB／c小鼠并建立

2、了間接ELISA篩選方法。經(jīng)過一系列的融合篩選，成功研制了抗I型DHVYZ株單克隆抗體4株，并在檢測DHV抗原、抗體方面進行了初步應用。本試驗中對3株I型DIP／在三種不同宿主系統(tǒng)中的增殖進行了比較。用雞胚和鴨胚進行3株DHv的增殖時，均可導致胚體出血、水腫、肝臟出血、邊緣壞死以及花斑肝等典型鴨肝炎癥狀。接種后死亡時間以DHV—YZ株最快，DHvZJS株最慢，ELD“O2m1分別為10“、10‘5、103?！薄２捎秒u胚成纖維細胞(CEF

3、)和雞胚肝細胞(CELc)對三株I型DHV進行細胞培養(yǎng)，結果表明三株DHV均能適應CELC培養(yǎng)，而DHVYZ株不能適應CEF培養(yǎng)。經(jīng)數(shù)代盲傳后，在CEF上兩株DHV表現(xiàn)基本相同，在48h時CPE開始出現(xiàn)；面在CELc上表現(xiàn)更為敏感，三株DHV在24h內即出現(xiàn)病交。兩種細胞病變相似，均表現(xiàn)為細胞圓縮，間隙拉寬，死亡脫落等，測得DHV—ZJS和DHv州J在CEF上的TCID。分別為10“1和103”，細胞適應能力DIN—ZJSDHVNJDH

4、VYZ。各個宿主增殖病毒回歸1日齡雛鴨均導致典型鴨肝炎癥狀。對雞胚和鴨胚增殖的尿囊液病毒用反復凍融、氯仿處理、022岫濾膜過濾、PEG反透析濃縮以及SephadexG200分子篩層析的方法進行純化，并以此來包被酶標板以及進行BALB／c小鼠免疫，效果良好。經(jīng)反復試驗，本研究確定了間接ELISA篩選陽性雜交瘤細胞株的最佳反應條件，即：抗原包被濃度為05心／孔，以1：6400稀釋的陰、陽性血清分別作為陰、陽性對照，反應條件均以37℃60ra