乙型肝炎病毒HBx蛋白的表達純化及Anti-HBx單克隆抗體的制備與初步應用.pdf

1、乙型肝炎(Hepatitis B virus，HBV)是我國當前最常見的一種傳染病，能引發(fā)嚴重的公共衛(wèi)生問題。原發(fā)性肝細胞癌(HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人們的健康。根據(jù)流行病學調(diào)查統(tǒng)計，HBV感染者發(fā)生HCC的幾率較正常人高100倍，HBV致癌的具體機制目前尚不明確。既往研究發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein）可能在增強HBV復制和HCC發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。HBx是

2、一個多功能蛋白，在細胞內(nèi)具有轉錄激活、導致細胞凋亡、激活多種信號轉導通路、干擾細胞DNA修補等特性，可能在HCC的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉移階段，通過多種尚未明確的機制，直接或間接地發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。探討HBx蛋白結構和功能是當前HBV研究的重要熱點之一。
　　本研究利用E.Coli原核表達系統(tǒng)對目前己知的基因型A-I的HBx進行非融合表達，建立了一套穩(wěn)定的、適用于不同基因型的rHBx表達、純化和復性方法，獲得了9種HBV基因型的高純度重組

3、HBx。并以此為基礎，制備了41株Anti-HBx單克隆抗體。通過表位分析、單抗性質(zhì)鑒定和一系列反應性評估實驗，篩選出了適用于蛋白印跡、免疫共沉淀和免疫熒光等功能性檢測的高親和力Anti-HBx單抗。借助Anti-HBx單抗，運用免疫共沉淀方法在轉染HBV1.3倍基因組的HepG2細胞中證實HBx可通過與Bcl-2和Bcl-XL的直接相互作用導致細胞凋亡和壞死。
　　綜上所述，本研究建立的重組HBx蛋白表達純化方法為進一步解析HB