梨果采后病害新型拮抗菌分離、篩選及安全性研究.pdf

1、水果在采摘、運(yùn)銷(xiāo)、以及儲(chǔ)藏過(guò)程中因腐爛造成的損失是巨大的，也是全球關(guān)注的問(wèn)題。在發(fā)達(dá)國(guó)家有10％-30％的新鮮產(chǎn)品由于采后病害導(dǎo)致腐爛，而在缺乏貯運(yùn)冷鏈設(shè)備的發(fā)展中國(guó)家，果實(shí)采后腐爛率則高達(dá)40％-50％。
　　 目前，最常用的有效控制水果腐爛的方法是低溫和化學(xué)殺菌劑處理。近年來(lái)雖然冷藏技術(shù)在我國(guó)得到了廣泛的發(fā)展，但是在低溫貯藏情況下，仍有相當(dāng)數(shù)量的病原菌可以在水果上面生長(zhǎng)，從而引起腐爛?；瘜W(xué)殺菌劑處理，雖然效果顯著，但是在殺死

2、病原菌的同時(shí)也殺死了有益微生物，且藥物殘留對(duì)人體健康和環(huán)境的危害很大?；瘜W(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染和由此帶來(lái)的食品安全問(wèn)題已成為當(dāng)今世界各國(guó)關(guān)注的熱點(diǎn)，用生物拮抗菌控制水果采后病害是替代或減少化學(xué)藥劑使用的有效途徑和發(fā)展方向。
　　 本研究從多種途徑分離篩選拮抗菌并確定其生物學(xué)分類(lèi)地位，篩選到生防效果性能優(yōu)良的菌種。研究了生物防治拮抗菌株的生物安全性，并對(duì)生防拮抗菌商品化制劑的生產(chǎn)工藝和保藏方法進(jìn)行了初步的探討。得到了如下的結(jié)論：

3、>　　 (1)通過(guò)體外試驗(yàn)和活體試驗(yàn)篩選，酵母菌Y20和Y21，對(duì)梨果灰霉病菌(Botrytiscinerea)、桃果青霉病菌(Penicilliumexpansum)兩種病原菌表現(xiàn)出較好的抑菌效果。對(duì)Y20和Y21二株菌株進(jìn)行形態(tài)特征、營(yíng)養(yǎng)特征和生理特性試驗(yàn)以及DNA分子序列測(cè)定，鑒定Y20為膠紅酵母（Rhodotorulamucilaginosa），Y21為接合酵母（Zygoascushellenicus）。目前，尚未見(jiàn)到Y(jié)20和

4、Y21兩種酵母菌在采后病害生物防治應(yīng)用中的報(bào)道。
　　 (2)酵母菌Y20和Y21兩株菌株的生長(zhǎng)速度很快，沒(méi)有明顯的遲滯期。Y20和Y21兩種拮抗酵母菌都能顯著地抑制梨果的灰霉病和青霉病，在1×107CFU/Ml、1×108CFU/Ml和1×109CFU/Ml的濃度下都能顯著降低梨果的腐爛率，且酵母濃度越高效果越好。拮抗酵母在1×108CFU/Ml濃度下對(duì)梨果灰霉病和青霉病具有穩(wěn)定的生防效果。拮抗酵母Y20、Y21(濃度1×10

5、8CFU/Ml)處理的梨果，在常溫下(20℃)放置45d后，梨果實(shí)的發(fā)病率顯著低于對(duì)照組，并且不會(huì)對(duì)梨果的貯藏品質(zhì)造成不良的影響。
　　 (3)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)研究表明，膠紅酵母Y20和接合酵母Y21經(jīng)口急性毒性的MTD>21.5g/kg，根據(jù)GB15193.3-2003附錄急性毒性劑量分級(jí)表的規(guī)定，均屬無(wú)毒級(jí)。Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)等遺傳毒性試驗(yàn)表明，膠紅酵母Y20和接合酵母Y21對(duì)小鼠無(wú)

6、致畸、致突變作用。在30d喂養(yǎng)試驗(yàn)中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)拮抗酵母對(duì)小鼠生長(zhǎng)，血液常規(guī)指標(biāo)、理化指標(biāo)、生理功能以及主要器官組織（肝臟、脾臟、腎臟等）產(chǎn)生不良影響。
　　 (4)用廉價(jià)的糖蜜為原料對(duì)Y20進(jìn)行培養(yǎng)基的優(yōu)化，均勻試驗(yàn)的結(jié)果表明以最優(yōu)的培養(yǎng)基組合：糖蜜16.58％，硫酸鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.05％，尿素0.3％培養(yǎng)酵母，可以得到最大生物量1.402g/100mL。
　　 (5)對(duì)Y20和Y21的凍干保藏制劑的研究表明

7、，Y20和Y21在6個(gè)月內(nèi)的活性可以保持在儲(chǔ)藏前的75.6％以上。兩株酵母凍干粉貯藏在4℃的條件下，可以在6個(gè)月內(nèi)保持良好的生物活性。對(duì)Y20和Y21液體保藏制劑的研究表明，在室溫20℃、4℃保存條件下的Y20菌懸液保存效果最好組為：10％海藻糖、0.0176％Vc和PBS混合保存液體。在室溫20℃、4℃保存條件下的Y21菌懸液保存效果最好組為：5％海藻糖、0.0176％Vc和PBS混合保存液體。
　　 (6)Y20和Y21保藏

8、期內(nèi)對(duì)梨果腐爛發(fā)病率的研究結(jié)果表明，無(wú)論采用凍干保藏還是液體保藏的菌體制劑，對(duì)于梨果的病害仍然具有良好的生防效果。
　　 綜上所述，拮抗酵母Y20和Y21作為梨果采后病害生物防治拮抗菌，為梨果采后病害生物防治提供了兩株生防性能優(yōu)良的菌株。通過(guò)對(duì)拮抗酵母Y20和Y21生防效果研究、安全性研究、商品化工藝的研究表明兩株酵母的生物防治效果顯著，安全無(wú)毒，具備商品化應(yīng)用的潛質(zhì)，為拮抗酵母Y20和Y21在水果采后生物保鮮技術(shù)的研究、菌株安