海洋拮抗酵母Rhodosporidium paludigenum對(duì)果實(shí)采后病害生物防治的研究.pdf

1、果蔬采后由致腐性真菌引起的經(jīng)濟(jì)損失是巨大的。利用拮抗微生物取代化學(xué)殺菌劑，或降低化學(xué)殺菌劑的使用量，具有巨大的應(yīng)用前景，這一領(lǐng)域的研究也是當(dāng)前采后病害控制的熱點(diǎn)。但目前既使是已商業(yè)化的生物防治微生物制劑，其效力與化學(xué)殺菌劑相比，仍有較大差距。因此，篩選新型高效的酵母拮抗菌，研究其對(duì)果蔬采后病害生物防治的效果及其機(jī)理，具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。
　　 本課題從中國(guó)東海近海海域中分離篩選到一株對(duì)果蔬采后病害具有較好抑制效果的海洋酵母

2、，經(jīng)鑒定為Rhodosporidium paludigenum Fell& Tallman(1984)。本文對(duì)海洋酵母R．paludigenum的生長(zhǎng)性能、安全性、分離干燥方法及對(duì)果蔬采后的主要致病菌和果蔬自然腐爛的抑制效果進(jìn)行了研究；探討了該酵母與其它防治手段結(jié)合使用對(duì)果蔬采后病害抑制效果的影響；初步研究了該酵母對(duì)果蔬致病菌的抑制機(jī)理及對(duì)果蔬貯藏后品質(zhì)的影響，并將其作為生防制劑用于櫻桃番茄采后保鮮中試實(shí)驗(yàn)。其主要研究結(jié)果如下：

3、　　 (1)從中國(guó)東海近海海域中分離篩選到一株對(duì)果蔬采后病害具有較好抑制效果的海洋酵母，經(jīng)英國(guó)國(guó)際微生物所菌種保存和鑒定中心(CABI Bioscience Identification Services)鑒定為Rhodosporidium paludigenum Fell& Tallman(1984)。
　　 (2)對(duì)足paludigenum耐鹽性和生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果表明：R．paludigenum與其它陸地生防酵母相比，具

4、有更高的耐鹽性；當(dāng)氯化鈉濃度達(dá)到16％時(shí)，菌體生長(zhǎng)才完全受到抑制，說(shuō)明該菌株是一株兼性海洋酵母；而且試驗(yàn)結(jié)果表明，R．paludigenum在NYDB培養(yǎng)基中28℃下培養(yǎng)時(shí)，酵母的生長(zhǎng)速度很快，沒(méi)有明顯的延滯期(Lag phase)，到27 h時(shí)，酵母細(xì)胞數(shù)目達(dá)到最高值，符合單細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的規(guī)律。
　　 (3)用R．paludigenum干粉制劑進(jìn)行了食品級(jí)小鼠急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)，初步確定該制劑屬于實(shí)際無(wú)毒類。
　　 (4

5、)探討了不同干燥方法、貯藏條件對(duì)R．paludigenum生物活性的影響。試驗(yàn)表明：采用10％脫脂乳作為冷凍干燥保護(hù)劑制能提高活性干酵母的存活率；并且在4℃密封保存條件下，活性干酵母的活性能在貯藏的前4個(gè)月時(shí)間內(nèi)得到較好的保持。
　　 (5)利用R．paludigenum對(duì)6種果實(shí)的5種主要采后致病菌進(jìn)行了生防試驗(yàn)：試驗(yàn)表明該酵母可顯著抑制鏈格孢、灰葡萄孢在番茄果實(shí)上的侵染；抑制指狀青霉、擴(kuò)展青霉引起的柑橘腐爛；抑制由鏈格孢引起

6、的冬棗腐爛；抑制灰葡萄孢引起的梨和蘋(píng)果腐爛；抑制由多毛孢引起的柿子腐爛。同時(shí)試驗(yàn)表明，R．paludigenum對(duì)病原真菌的抑制效力與其細(xì)胞懸浮液的濃度有關(guān)，濃度越高，對(duì)致病菌的抑制作用也越強(qiáng)。以上結(jié)果說(shuō)明R．paludigenum可能是具有一定廣譜抗菌活性的新型生物拮抗菌。
　　 (6)對(duì)R． paludigenum拮抗機(jī)理的研究結(jié)果表明，營(yíng)養(yǎng)與空間的競(jìng)爭(zhēng)可能是R．paludigenum抑制致病霉菌的主要方式；此外，R．pal

7、udigenum能激發(fā)與果實(shí)抗性相關(guān)的酶活性，如POD、PPO等，因此誘導(dǎo)果實(shí)的自身抗性可能也是足paludigenum抑菌機(jī)制的一部分。
　　 (7)R．paludigenum能和多種防治手段相結(jié)合，顯著增強(qiáng)對(duì)果實(shí)采后病害的防治效果：R．paludigenum和適當(dāng)濃度金屬鹽類(氯化鈉、氯化鈣)、多種食品添加劑(碳酸鹽、CMC—Na，尼泊金酯鈉鹽等)結(jié)合使用，能降低櫻桃番茄、冬棗等果實(shí)的腐爛率：該酵母和低劑量殺菌劑嘧霉胺結(jié)合使

8、用時(shí)，對(duì)櫻桃番茄灰霉病發(fā)病率的控制效果與常規(guī)劑量嘧霉胺單獨(dú)使用時(shí)接近；與熱處理結(jié)合，也能降低對(duì)櫻桃番茄黑斑病的發(fā)病率；此外，試驗(yàn)還表明，1×107 cells/mL，R．paludigenum和熱處理、尼泊金丁酯鈉三種方法結(jié)合使用時(shí)，對(duì)櫻桃番茄黑斑病的控制顯著低于1×108 eells/mL R． paludigenum單獨(dú)處理的水平。
　　 (8)R． paludigenum單獨(dú)作用或結(jié)合其他防治手段，對(duì)櫻桃番茄、柑橘、冬棗等

9、果實(shí)貯藏時(shí)自然腐爛均具有顯著的抑制作用；經(jīng)R．paludigenum處理的櫻桃番茄、冬棗和柑橘等果實(shí)，其在貯藏期間的品質(zhì)指標(biāo)與對(duì)照果實(shí)相比，沒(méi)有明顯的差異。
　　 (9)R．paludigenum對(duì)番茄采后病害生物防治中試結(jié)果表明，該酵母對(duì)櫻桃番茄采后灰霉病和黑斑病的防治具有顯著的效果，當(dāng)1×108 cells/mL R．paludigenum和2％氯化鈣結(jié)合使用，或1×107cells/mL R．paludigenum和低劑量