牛和豬可食性組織及牛奶中9種β-受體阻斷劑殘留高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法的建立.pdf

1、β-受體阻斷劑(β-blockers)是一類能選擇性與β-腎上腺素受體結(jié)合，從而拮抗神經(jīng)遞質(zhì)對β-腎上腺素受體激動作用的藥物。因具有一定的鎮(zhèn)靜作用，在畜牧業(yè)養(yǎng)殖中常被非法用于促生長或抗應(yīng)激，從而導(dǎo)致在動物可食性組織中殘留，對人體健康造成威脅?；诖?，本研究擬建立牛和豬可食性組織及牛奶中卡拉洛爾、醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、拉貝洛爾、美托洛爾、納多洛爾、噴布洛爾、普萘洛爾共9種β-受體阻斷劑的殘留檢測方法，不僅為今后該類藥物的殘留監(jiān)控提

2、供技術(shù)手段，而且對提高動物性食品質(zhì)量，保障消費者健康具有現(xiàn)實意義。
　　1.建立牛和豬可食性組織中β-受體阻斷劑多組分殘留的HPLC-MS/MS檢測方法
　　樣品前處理及凈化:組織樣品勻漿后冷凍，再復(fù)融，用β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶水解，乙腈提取，之后用基質(zhì)分散固相萃取技術(shù)(MSPD)對提取液進(jìn)行凈化。
　　HPLC-MS/MS檢測條件:以0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈水溶液為流動相，梯度洗脫;利用Wate

3、rs ACQUITY UPLC(@)HSS T3(100mm×2.1mm，1.8um)色譜柱進(jìn)行分離;采用ESI源正離子模式電離，MRM模式進(jìn)行掃描，內(nèi)標(biāo)法定量。
　　檢測方法確證:9種β-受體阻斷劑在0.5～50μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.99。以空白牛和豬組織樣品進(jìn)行加標(biāo)試驗，加標(biāo)水平為2.5μg/kg、5μg/kg、25μg/kg時，牛肝組織中各樣品平均回收率在87.6％～112.2％之間，日內(nèi)和日間

4、的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在2.0％～12.2％和5.6％～15.1％之間;牛肌肉組織中各樣品平均回收率在86.7％～104.6％之間，日內(nèi)和日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在2.2％～12.2％和8.5％～13.0％之間;牛腎組織中各樣品平均回收率在85.4％～108.5％之間，日內(nèi)和日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在3.6％～12.6％和6.0％～15.8％之間;豬肝組織中各樣品平均回收率在84.4％～114.2％之間，日內(nèi)和日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏

5、差(RSD)在2.0％～12.6％和4.8％～18.7％之間;豬肌肉組織中各樣品平均回收率在84.9％～100.2％之間，日內(nèi)和日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在2.0％～11.5％和2.9％～15.5％之間;豬腎組織中各樣品平均回收率在87.1％～114.2％之間，日內(nèi)和日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在3.0％～14.6％和4.2％～15.0％之間。本研究中9種β-受體阻斷劑在牛和豬可食性組織中的檢測限和定量限分別為1μg/kg和2.5μg

6、/kg。
　　2.建立牛奶中β-受體阻斷劑多組分殘留的HPLC-MS/MS檢測方法
　　樣品前處理及凈化:牛奶樣品冷凍后再復(fù)融，利用2ml15％三氯乙酸和4ml乙腈水解提取，MCX柱凈化。
　　HPLC-MS/MS檢測條件:同上述可食性組織樣品的檢測條件。
　　檢測方法確證:9種β-受體阻斷劑在0.5～50μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.99。以空白牛奶進(jìn)行加標(biāo)試驗，加標(biāo)水平為0.5μg/kg

7、、1μg/kg、5μg/kg時，牛奶中平均回收率介于87.6％～112.2％之間，5μg/kg濃度的加標(biāo)水平下日內(nèi)和日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在2.0％～12.2％和5.6％～15.1％之間。本試驗牛奶中9種β-受體阻斷劑的檢測限為0.2μg/kg，而定量限為0.5μg/kg。
　　綜上所述，本研究建立的檢測方法中，牛和豬組織、牛奶中9種β-受體阻斷劑在3種不同濃度的加標(biāo)水平下，回收率均大于85％，加標(biāo)水平下的日內(nèi)與高濃度加標(biāo)水