玉米紋枯病菌(Rhizoctoniasolani AG-1-IA)β-1,4-內(nèi)切纖維素酶的基因克隆表達及功能研究.pdf_第1頁
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1、山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文玉米紋枯病菌（RhizoctoniasolaniAG1IA）β14內(nèi)切纖維素酶的基因克隆表達及功能研究姓名：李海云申請學位級別：碩士專業(yè)：@指導教師：李多川201012玉米紋枯病菌（RhizoctoniasolaniAG1IA）β14內(nèi)切纖維素酶的基因克隆表達及功能研究2AbstractCnsheathblightisasoilbnediseaseintheCnBeltaroundthewldwhichhasbe

2、comeanimptantdiseaseincnproductionincreasedgradually.ThemainpathogenofcnsheathblightisRhizoctoniasolaniKhnwhichbelongedtoRhizoctoniahavingawidespreadhostrangeincludingricecnsoybeanbarleywheatsooncausingsheathblight.Rhizo

3、ctonia.solanicanproducemanycellwalldegradationenzymessuchasPolygalacturonase(PG)cellulase(Cx)becomethemainpathogenicityfact.Inthisstudydegenerateprimersweredesignedontheconserveddomainofotherreptedglycosidehydrolasefamil

4、y45protein.ThroughRTPCR3’RACEPCR5’TAILPCRtwoβ14endocelluasegeneswereclonedfromRhizoctoniasolaniAG1IAnamedEG1EG2respectively.ThefulllengthofEG1DNAgeneis1061bpcontainingsevenintronswhichaccessionnumberofcDNADNAinGenBankisG

5、U372731GU372728respectivelyThefulllengthofEG2DNAgeneis1086bpcontainingsevenintronswhichaccessionnumberofcDNADNAinGenBankisGU372730GU372729respectively.ThegeneofEG1EG2constructedrecombinationexpressionplaspPIC9KEG1pPIC9KE

6、G2linearizedbyrestrictionenzymeSacIthentransfmedtoPichiapastisGS115.TherecombinantP.pastisPEG45wasobtainedfrompPIC9KEG1itsexpressionlevelwasupto0.35mgmLattheeightday.Themolecularmassofasingleboftheenzymewasestimatedtobe2

7、8.05kDausingsodiumdodecylsulfatepolyacrylaegelelectrophesis.TheoptimumreactionpHvalueoftheexpressedbeta14endocellulasewas3.0theoptimumreactiontemperaturewas45℃.TherecombinantP.pastisofpPIC9KEG2wasnotdetectedtargetprotein

8、afterfermentation.weinoculatedRhizoctonia.solanitocnleavesfoundthehyphahaveapowerfulinfectionability.ThroughRTPCRweconfirmedthatβ14endocellulaseEG1EG2EGIIIcanexpressintheprocess.BychanginginductivesubstratesofMarcusmediu

9、mwefoundtheoptimumsubstratefβ14endocellulaseisCMCNa.weinoculatedthecnleavesbypurifiedβ14endocellulasefromPEG45takeninactivatedendocellulaseascontrastfoundthattherewereobviousdiseasespotsinvaccinationsitesexpedalongthevei

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