捕食性真菌-Duddingtonia flagrans胞外蛋白酶的誘導(dǎo)與純化及其性質(zhì)研究.pdf

1、為確定捕食線蟲性真菌-Duddingtonia flagrans分泌產(chǎn)生胞外蛋白酶的最佳培養(yǎng)基及誘導(dǎo)物，并對(duì)胞外蛋白酶的生化性質(zhì)進(jìn)行研究。本論文首先利用含不同誘導(dǎo)物的LMZ培養(yǎng)基、枸椽酸培養(yǎng)基及大豆蛋白胨培養(yǎng)基，分別對(duì)Duddingtonia flagrans進(jìn)行培養(yǎng)，將產(chǎn)生的發(fā)酵液過濾后，測(cè)定其蛋白質(zhì)含量、蛋白酶及磷酸酶活性，并用發(fā)酵液進(jìn)行殺蟲試驗(yàn)；在確定Duddingtonia flagrans產(chǎn)生胞外蛋白酶的最佳培養(yǎng)基及誘導(dǎo)物的基

2、礎(chǔ)上，利用其培養(yǎng)Duddingtonia flagrans并收集發(fā)酵液，然后分別用硫酸銨鹽析粗提發(fā)酵液中的胞外蛋白質(zhì)，對(duì)粗提物進(jìn)行蛋白質(zhì)含量、蛋白酶活性、磷酸酶活性及殺蟲作用的研究，確定鹽析沉淀粗提胞外蛋白質(zhì)的最佳鹽濃度；在此基礎(chǔ)上，收集胞外蛋白質(zhì)粗提物，通過SephadexG-100分子篩對(duì)其層析純化，并檢測(cè)酶活性，繼而對(duì)純化的具有酶活性的胞外蛋白質(zhì)即胞外蛋白酶進(jìn)行生化性質(zhì)研究。
　　結(jié)果顯示：1.用不同誘導(dǎo)物和培養(yǎng)基培養(yǎng)Dud

3、dingtonia flagrans，其發(fā)酵液中蛋白質(zhì)種類、濃度、蛋白酶和磷酸酶活性及殺蟲作用顯著不同，其中馬圓線蟲誘導(dǎo)的枸椽酸培養(yǎng)基發(fā)酵液蛋白質(zhì)種類和含量最多，蛋白酶和磷酸酶活性最高，殺蟲作用最強(qiáng)。此外試驗(yàn)還證實(shí)Duddingtonia flagrans發(fā)酵液不僅具有殺線蟲活性，而且也具備殺蠅蛆作用。2.采用不同鹽濃度從Duddingtonia flagrans發(fā)酵液中鹽析粗提的蛋白質(zhì)性質(zhì)和種類不同，其中硫酸銨飽和度在45％～65%的

4、粗提物蛋白質(zhì)含量最高、種類最多、酶活性與殺線蟲作用最強(qiáng)，且硫酸銨不會(huì)破壞胞外蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與活性。3.被純化的3種胞外蛋白酶分子量約為63KDa、38KDa、19KDa，這3種胞外蛋白酶酶活性的pH和溫度范圍都比較大，其最適PH為6.5、最適溫度為50℃。不同酶抑制劑對(duì)3種胞外蛋白酶抑制作用不同。其中菲羅啉和抑肽素對(duì)分子量63KDa、19KDa的胞外蛋白酶抑制作用很強(qiáng)，而PMSF對(duì)分子量38KDa的胞外蛋白酶抑制作用很強(qiáng)。
　　上述