扁座殼孢菌蛋白酶的純化及性質(zhì)研究.pdf

1、座殼孢是一種重要的的蟲生真菌，在其侵染害蟲過程中產(chǎn)生的蛋白酶是重要毒力因子。基于形態(tài)特征WYSD—16被鑒定為扁座殼孢，以WYSD—16為試驗材料，先通過單因素的粗篩和正交實(shí)驗設(shè)計優(yōu)化的方法，獲得對座殼孢菌產(chǎn)酶條件優(yōu)化的培養(yǎng)基。采用單因素篩選法研究碳源、氮源以及維生素對產(chǎn)酶量的影響，結(jié)果表明麥芽糖、蛋白胨、Mg2+、VB6分別為最適合該菌產(chǎn)酶的碳源、氮源、金屬離子和維生素。通過對碳源、氮源、維生素等其他因素的正交優(yōu)化得出該菌最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)

2、基：40g/L的麥芽糖，20g/L的蛋白胨，4×10—4mol/LMg2+，400mg/L的VB6，pH6.0；最佳產(chǎn)酶條件為：接菌量8ml，裝液量1.50ml/250ml，菌齡5d，培養(yǎng)時間10d。座殼孢菌利用優(yōu)化后的產(chǎn)酶培養(yǎng)基培養(yǎng)10d后，蛋白酶活達(dá)到73.18U/mL。采用硫酸銨沉淀、DEAE—52離子交換柱層析、SephadexG—100柱層析等步驟獲得了凝膠電泳均一的蛋白酶，經(jīng)SDS—PAGE電泳驗證表明酶蛋白的分子量約為66