PHBV胞外解聚酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、目前最常見的生物降解材料是聚羥基烷酸酯(PHAs)。PHAs具有類似于通用塑料的物化特性，生物可降解性，生物相容性，資源可再生性等。PHBV（3一羥基丁酸與3一羥基戊酸的共聚物）是PHAs的一種，具有優(yōu)良的理化性質(zhì)和較好的加工性能，最有工業(yè)前景和吸引力。但是目前關(guān)于PHBV降解的研究還較少，本論文研究門多薩假單胞菌對PHBV的降解，分離純化PHBV胞外解聚酶，并對酶學(xué)性質(zhì)進行表征。主要結(jié)果如下：
　　 1、PHBV的降解。通過P

2、HBV粉末固體平板點植法培養(yǎng)，菌落周圍出現(xiàn)了透明圈，培養(yǎng)2d透明圈的直徑是2cm，培養(yǎng)4d透明圈的直徑是3.7cm。PHBV粉末液體培養(yǎng)降解實驗表明，24d PHBV粉末完全消失。PHBV膜降解實驗表明，PHBV膜在實驗室搖瓶培養(yǎng)下6d徹底降解。
　　 2、PHBV胞外解聚酶分離純化。本實驗優(yōu)化了分離純化步驟，經(jīng)離心，超濾，酶活回收率是4％。
　　 3、PHBV解聚酶分子量測定。已純化的PHBV胞外解聚酶，經(jīng)TCA沉淀后

3、，進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。PHBV解聚酶純酶的相對分子量為30.3 kDa。
　　 4、PHBV胞外解聚酶酶學(xué)性質(zhì)。PHBV解聚酶粗酶和純酶的酶學(xué)性質(zhì)差別不大，最適反應(yīng)溫度為50℃，在10-50℃的溫度范圍內(nèi)比較穩(wěn)定，最適反應(yīng)pH為8.6，在pH值為8-9.5范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好。不同種類、濃度的金屬離子對PHBV解聚酶活力的影響不同。Ca2+、Mn26+、Co2+、K+對PHBV解聚酶有明顯的激活作用，