人工老化芥菜種子生理生化變化及基因組DNA損傷的ISSR研究.pdf

1、本試驗以六個芥菜(Brassicajuncea Czern.et Coss.)栽培品種為研究材料，采用高溫高濕人工加速種子老化的方法，得到不同老化程度的芥菜種子，通過對其生理生化指標變化與種子活力關(guān)系的分析和干種子基因組DNA損傷的ISSR研究，擬找出反映芥菜種子活力的主要生理生化指標，并在分子水平上探索出表現(xiàn)芥菜種子不同老化程度的DNA特異性譜帶，從而為芥菜種質(zhì)資源保存和生產(chǎn)實踐中種子活力的測定提供實際參考和理論依據(jù)。試驗結(jié)果表明：<

2、br>　　 1.芥菜種子經(jīng)人工老化(40℃，100％濕度)后，發(fā)芽率和活力指數(shù)隨老化時間的延長而下降。在供試的六個品種中，大頭菜的抗老化能力最差，老化處理6天時已完全喪失活力；青菜和香芥菜的發(fā)芽率變化情況相似，老化前期下降緩慢，到8天時陡然下降；榨菜的發(fā)芽率下降規(guī)律也呈先慢后快的趨勢，但轉(zhuǎn)折的時間較早，發(fā)生在老化的第6天；青皮棒菜和兒菜的活力變化規(guī)律近似，從老化處理開始，種子活力就直線降低。從幾個品種老化處理后活力的變化情況可得出，芥

3、菜種子老化6～8天為活力從有到無的轉(zhuǎn)折點。
　　 2.在芥菜種子老化過程中，種子的相對電導(dǎo)率、MDA含量與種子活力呈負相關(guān)，而可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、SOD活力和POD活力與種子活力呈正相關(guān)。其中①芥菜種子的相對電導(dǎo)率隨種子老化時間的延長逐漸升高。②除青皮棒菜的MDA含量在上升過程中有一個細微的回落外，其余芥菜品種種子中MDA含量均隨種子老化程度的加深而逐漸上升，且大頭菜和兒菜的變化趨勢完全一致，即前期緩慢升高，老化4天后

4、突然增加。③在芥菜老化種子中，可溶性蛋白質(zhì)的含量并不是呈穩(wěn)定的下降趨勢，而是在某個階段有一個緩慢的回升過程，且不同品種可溶性蛋白含量的回升階段各不相同，大頭菜、榨菜、香芥菜的回升區(qū)域在老化4～6天，青菜和青皮棒菜的回升區(qū)域在2～4天，而兒菜無明顯回升跡象。④SOD活力和POD活力變化的總趨勢表現(xiàn)為老化的前4天活力降低顯著，隨后緩慢下降。不同品種SOD和POD活力的變化差異很大，大頭菜、兒菜和青皮棒菜種子中POD和SOD的初始活力相對較高

5、，但老化過程中活力降低迅速；而榨菜、青菜和香芥菜種子中的POD和SOD的初始活力雖然較低，但老化過程中降低緩慢。
　　 3.對所測的不同老化程度種子生理生化指標的主成分分析結(jié)果顯示，第一主成分由發(fā)芽率、活力指數(shù)、相對電導(dǎo)率和MDA四個指標決定，它們與種子的老化程度緊密相關(guān)，可以作為研究種子老化程度的代表性因子;第二主成分主要由POD活力決定，它與SOD活力和可溶性糖含量有一定相關(guān)性；第三主成分由可溶性蛋白含量單一決定。
　

6、　 4.對人工老化芥菜干種子DNA的提取方法進行比較分析，找到了老化芥菜干種子DNA提取的適宜方法——改良CTAB-Ⅰ法，它是在改良CTAB法基礎(chǔ)上改進得出的。具體改進步驟為①抽提液用25∶24∶1的Tris飽和酚/氯仿/異戊醇代替了24∶1的氯仿/異戊醇；②抽提次數(shù)由一次增加到三次；③提取出的DNA最后溶解時加入1μL的RNA水解酶。此方法在老化芥菜干種子中提取的DNA純度高、破損小、完整性好。
　　 5.篩選出適合老化芥菜