轉Cry1Ab基因水稻側翼序列的擴增和轉化體特異事件檢測.pdf

1、近年來，全國轉基因作物研究的迅速發(fā)展成功的解決了作物的抗病蟲及抗逆等問題，同時也為其他問題的解決提供了很好的途徑。除了獲得了目標性狀外，轉基因作物由于外源基因的插入可能會影響原有的基因網(wǎng)絡，引起轉基因植物的生理生化變化及代謝途徑的改變，進而使轉基因作物產(chǎn)生非預期效應，成為糧食食用安全問題的潛在威脅因素。轉基因作物潛在的安全性問題引起了人們廣泛的關注，各國相繼出臺了相關的轉基因標識管理法規(guī)，因此，作為轉基因產(chǎn)品安全檢測的研究顯得尤為重要。

2、本研究以共轉化獲得的不含篩選標記的44株轉Cry1Ab基因水稻為材料，對外源基因在水稻染色體上的插入位點進行了分析，為轉Cry1Ab基因水稻的代謝途徑的研究做準備，同時也為其環(huán)境釋放安全檢測提供理論參考。
　　通過改進熱不對稱交錯PCR(TAIL-PCR)方法，使用5個簡并引物對44個轉Cry1Ab基因水稻株系進行擴增，成功地分離并測定了36個株系的側翼序列，成功率約為82％。利用生物信息學分析轉Cry1Ab基因水稻外源插入基因的

3、分子特征，結果表明這些植株大體上來自于四個轉化事件，其中有24個材料屬于第一個轉化事件，其整合位點在第二號染色體上，有3個材料屬于第二個轉化事件，這些植株的側翼序列與水稻基因組中不同染色體序列具有高度同源性，有6個樣品屬于第三個轉化事件，為多拷貝植株，有3個樣品屬于第四個轉化事件，為串聯(lián)重復拷貝的植株，這些側翼序列的獲得為后期研究和評價轉Cry1Ab基因水稻可能產(chǎn)生的非預期效應提供了必要的實驗基礎。轉Cry1Ab基因抗蟲水稻Bt01已申

4、請進行環(huán)境釋放試驗，通過southern雜交實驗，結果表明轉Cry1Ab基因抗蟲水稻Bt01為單拷貝植株。建立的轉Cry1Ab基因抗蟲水稻Bt01的轉化體特異性定性、定量檢測方法，經(jīng)實驗得出轉化體特異性定性PCR檢測體系的最低鑒定極限為10個拷貝，定量PCR檢測體系的LOD為5個拷貝，LOQ為10個拷貝。結果表明：本研究建立的事件特異性定性與定量檢測方法適用于轉Cry1Ab基因抗蟲水稻Bt01定性和定量檢測，并且具有穩(wěn)定性好、特異性強和