克螟稻中cry1Ab基因表達產(chǎn)物在土壤中的環(huán)境行為.pdf

1、該文以轉(zhuǎn)Bt(cry1Ab)基因水稻-克螟稻(KMD)及其親本水稻-秀水11(Xiushui11)為試材,通過田間和實驗室試驗,研究了克螟稻生育期間Bt蛋白的表達、分泌、土壤中的殘留及秸稈還土后Bt蛋白在土壤中的降解規(guī)律;同時從克螟稻秸稈中純化制備出Bt純蛋白,進而研究該蛋白在不同土壤中的吸附解吸與降解規(guī)律.試驗中還對抗性選擇標(biāo)記基因(nptⅡ、hpt)水平轉(zhuǎn)移到土壤細(xì)菌的可能性進行了初步探討.主要結(jié)果如下:1)Bt蛋白純化制備和土壤中

2、Bt蛋白提取方法的建立采用0.1M Na<,2>CO<,3>-NaHCO<,3>+5.0mM DTT緩沖液作為提取劑以提取克螟稻秸稈中的Bt蛋白.提取液經(jīng)冷凍干燥濃縮和截留分子量濃縮至較小體積,然后用(NH<,4>)<,2>SO<,4>分級沉淀(20％去雜蛋白,80％收集Bt粗蛋白)、離子交換色譜(A-50)、凝膠滲透色譜(G-150)等步驟后,得到了純度較高的Bt蛋白(經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測相對純度80％以上).生物活性測定表明,

3、純化制備所得的Bt純蛋白仍保留殺蟲活性.國內(nèi)外現(xiàn)有的方法難以有效地提取土壤中的Bt蛋白(提取效率4.6~35％),為研究Bt蛋白在土壤環(huán)境中的行為與歸趨,建立適宜的提取方法尤為重要.本研究通過添加回收率試驗(分別添加Bt純蛋白和克螟稻秸稈),比較了3種提取方法對不同土壤中Bt蛋白的提取效率,得出了適用于從土壤中提取Bt蛋白的方法.2)Bt純蛋白和克螟稻秸稈中的Bt蛋白在土壤中的降解規(guī)律Bt純蛋白的添加培養(yǎng)試驗表明,在7種不同土壤中其降解