糖蛋白G基因在基因組P-M位的插入重組表達(dá)對(duì)狂犬病毒Flury LEP致病力的影響.pdf

1、狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)引起的人獸共患傳染病,幾乎所有溫血?jiǎng)游锒紝?duì)RV易感,因RV具有高度嗜神經(jīng)性,其病死率高居各傳染病之首,一旦發(fā)病幾乎100％死亡,因而嚴(yán)重威脅著人類和動(dòng)物的健康,至今尚未研究出有效的治療狂犬病的方法。RV主要的儲(chǔ)存宿主為野生動(dòng)物,但是犬在攜帶和傳播RV中起重要作用,是人畜感染狂犬病的最主要的來(lái)源。每年由犬狂犬病造成的人的死亡有55000多例,其中95％以上存在亞洲、非洲及拉丁美洲地區(qū)的

2、發(fā)展中國(guó)家,且大多數(shù)死亡(84％)都發(fā)生在農(nóng)村。所以動(dòng)物特別是犬的狂犬病的預(yù)防在降低狂犬病的發(fā)生率上起到關(guān)鍵作用。目前國(guó)內(nèi)預(yù)防狂犬病的發(fā)生主要使用滅活苗免疫動(dòng)物,而糖蛋白(glycoprotein,GP)的量在很大程度上決定了滅活疫苗的有效性,GP是RV唯一的膜表面蛋白,參與病毒的吸附、傳播,并與宿主細(xì)胞相互作用,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生病毒中和抗體(VNA),并能刺激T細(xì)胞產(chǎn)生免疫,在病毒的致病和免疫中起著關(guān)鍵作用。GP還與病毒的神經(jīng)嗜性有關(guān),R

3、V的主要特征是其神經(jīng)侵入性,即病毒感染宿主后會(huì)以其獨(dú)特的方式從外周神經(jīng)通過(guò)神經(jīng)節(jié)軸突運(yùn)輸侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。同時(shí)GP也與RV的致病性相關(guān)。國(guó)內(nèi)外已有實(shí)驗(yàn)室分別在基因組第一位、N-P位點(diǎn)、G-L位點(diǎn)插入G基因,構(gòu)建出含有兩個(gè)甚至三個(gè)G基因的重組狂犬病毒,并發(fā)現(xiàn)這些重組病毒與親本病毒相比,均表現(xiàn)為致病力降低、GP在感染細(xì)胞中的表達(dá)量提高、免疫原性增強(qiáng)的趨勢(shì)。但是在P-M位點(diǎn)插入額外GP基因?qū)χ亟M病毒致病力和免疫原性的影響,尚未有報(bào)道

4、。為了研究RV增加G基因的重組表達(dá)對(duì)病毒致病力的影響,本研究利用負(fù)鏈RNA病毒反向遺傳技術(shù),構(gòu)建了P、M基因之間額外插入G基因的重組狂犬病病毒Flury LEP株(rLEP-PGM)。并就重組病毒體外生長(zhǎng)滴度、GP的表達(dá)水平及對(duì)小鼠的致病力等生物學(xué)特性,與親本株LEP進(jìn)行了比較研究。親本株和重組病毒具有相似的生長(zhǎng)特性,LEP和rLEP-PGM在BHK-21細(xì)胞的生長(zhǎng)滴度分別為4×106FFU／mL和2.5×106FFU／mL,在小鼠神經(jīng)

5、母細(xì)胞(NA)的生長(zhǎng)滴度分別為4×107FFU／mL和2.5×107 FFU／mL,嗜神經(jīng)指數(shù)均為1；Western blot分析顯示,rLEP-PGM在感染細(xì)胞的GP表達(dá)量比LEP顯著提高；小鼠感染試驗(yàn)顯示,rLEP-PGM與LEP腦內(nèi)注射小鼠的MLD50分別為3 FFU和1 FFU,肌肉注射途徑的MLD50分別為4.6 LgFFU和5.5 Lg FFU。結(jié)果表明,P-M基因之間插入一個(gè)額外的G基因能夠提高GP的表達(dá)水平,同時(shí)增強(qiáng)重組