稻瘟菌效應(yīng)因子的篩選、克隆及其功能研究.pdf

1、背景與目的:稻瘟菌效應(yīng)因子(Effector protein,EP)由于其在致病過程中扮演著重要角色而越來越受到廣大植病學(xué)者的重視。對于EP的研究能夠揭示稻瘟菌和水稻之間的分子互作機(jī)理,為防治稻瘟病乃至徹底解決這一病害問題提供幫助。目前關(guān)于EP的研究存在的困難主要表現(xiàn)在發(fā)掘新的EP和研究其功能等方面。本研究通過對稻瘟菌全基因組的解讀預(yù)測分析與稻瘟菌侵染水稻36小時(shí)后轉(zhuǎn)錄組高通量測序分析的手段,同時(shí)結(jié)合基因的特異性表達(dá),期望成功篩選出一些

2、重要的EP,并對其功能進(jìn)行探索。以期為探索克隆病原菌效應(yīng)因子提供新的路線。
　　 方法:(1)通過生物信息學(xué)分析稻瘟菌基因組預(yù)測基因和ROR1侵染日本晴水稻36小時(shí)后的葉片總RNA高通量測序結(jié)果,同時(shí)結(jié)合的基因特異性表達(dá)驗(yàn)證(RTPCR),篩選與致病相關(guān)的EP。(2)將已篩選出的EP構(gòu)建進(jìn)水稻過表達(dá)載體pCambia1305.2,通過水稻轉(zhuǎn)化,獲得水稻轉(zhuǎn)基因系。(3)分析2-3018發(fā)現(xiàn)其具有BIR結(jié)構(gòu)域,并通過構(gòu)建稻瘟菌過表達(dá)

3、載體pCB1532、稻瘟菌敲除載體(△T)、稻瘟菌重組啟動子載體pCSN43和煙草瞬時(shí)表達(dá)pvx系列載體研究其功能。
　　 結(jié)果:(1)成功獲得了45個(gè)候選EP,并最終確定了包括2-3018在內(nèi)的12個(gè)進(jìn)行研究的EP,證明以上方法在發(fā)掘并克隆EP上是可行的。(2)構(gòu)建了研究EP的過表達(dá)載體,完成了水稻的轉(zhuǎn)化,獲得了水稻轉(zhuǎn)基因植株。(3)構(gòu)建了研究2-3018的幾種載體,為下一步研究其功能打下基礎(chǔ)。
　　 結(jié)論:(1)成功

4、篩選出了一部分。EP,為探索克隆病原菌效應(yīng)因子提供了新路線。(2)成功構(gòu)建了EP水稻過表達(dá)載體pCambial305.2-EP,并通過水稻轉(zhuǎn)化,獲得了水稻轉(zhuǎn)基因系。(3)成功分析并發(fā)掘出EP2-3018的BIR結(jié)構(gòu)域,并構(gòu)建了它的稻瘟菌過表達(dá)載體pCB1532-3018,稻瘟菌敲除載體△T KF2-3018,△TKFbir,稻瘟菌重組啟動子載體pCSN43-3018F1,pCSN43-3018F2,煙草瞬時(shí)表達(dá)載體PVX-3018,PV