稻瘟菌cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及其激活蛋白編碼基因的克隆與表達(dá)研究.pdf

1、水稻稻瘟病是一種世界性的水稻病害。在有利于發(fā)病的條件下，嚴(yán)重發(fā)病的田塊，產(chǎn)量損失高達(dá)80％。傳統(tǒng)的防治病蟲(chóng)害方法是以采用化學(xué)農(nóng)藥為主要手段，雖有一定效果但易產(chǎn)生病蟲(chóng)抗藥性，給環(huán)境帶來(lái)災(zāi)難性的破壞。所以，開(kāi)發(fā)和使用新型綠色生物農(nóng)藥是科學(xué)家們面臨的緊迫而艱巨任務(wù)。 激活蛋白是一類從病原真菌中分離純化的一種新型耐熱蛋白，對(duì)煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒等植物病毒有顯著的誘抗活性，可望成為一類新型的生物農(nóng)藥。為了進(jìn)一步推動(dòng)激活蛋白的研究與應(yīng)

2、用，本論文采用固相構(gòu)建法成功構(gòu)建稻瘟菌cDNA文庫(kù)，該文庫(kù)的庫(kù)容量為5×107，文庫(kù)滴度為1×107，陽(yáng)性克隆率為98％。以所建文庫(kù)的噬菌體DNA為模板，根據(jù)前人已獲得的激活蛋白的部分序列設(shè)計(jì)了兩個(gè)特異性引物，用PCR法從文庫(kù)中成功克隆獲得編碼激活蛋白的cDNA序列，該序列共有951個(gè)堿基，編碼316個(gè)氨基酸。 以克隆的激活蛋白基因?yàn)槟康幕颍瑯?gòu)建了原核表達(dá)載體pGEX-XF-1，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21和ER2566中，通過(guò)IP