控制稻瘟菌菌絲生長基因的克隆.pdf

1、稻瘟菌(Magnaporthe grisea)可侵染多種禾本科植物,是引起水稻稻瘟病的病原真菌,也是研究植物病原真菌的模式真菌之一.通過篩選稻瘟菌的REMI轉(zhuǎn)化體庫,獲得一個(gè)生長緩慢型突變體S2514.在CM固體培養(yǎng)基上突變體S2514的菌落生長速度是野生型P131的45﹪.通過與其野生型菌株P(guān)131主要生物學(xué)性狀的比較,發(fā)現(xiàn)S2514不僅生長緩慢,而且在分生孢子形態(tài)以及致病性上也發(fā)生了改變.與O131相比,S2514的分生孢子明顯變短

2、變粗,表現(xiàn)為孢子不成熟;而且完全喪失了對感病寄主麗江新團(tuán)黑谷致病性.通過遺傳雜交確定突變體S2514菌絲生長緩慢、分生孢子形態(tài)變異以及致病性喪失的突變表型是由于REMI轉(zhuǎn)化過程中外源質(zhì)粒的插入引起的.通過Southern blot分析確定質(zhì)粒在基因組中是單位點(diǎn)插入,并且通過質(zhì)粒拯救獲得了插入質(zhì)粒右側(cè)的側(cè)端序列.測序后與稻瘟菌的基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較,確定這段序列位于Contig2.1938,定位在稻瘟菌的第Ⅴ條染色體上,插入位點(diǎn)在此Con

3、tig的6635的位置.而先前獲得的插入質(zhì)粒左側(cè)的序列位于Contig2.610,定位于第Ⅶ條染色體.插入質(zhì)粒兩端的序列被定位于兩個(gè)不同的染色體上,可能是由于在REMI轉(zhuǎn)化過程中基因組DNA的缺失或重排造成的.用GENSCAN預(yù)測出質(zhì)粒插入位置右側(cè)的基因是一個(gè)編碼656個(gè)氨基酸的基因.以側(cè)端序列為探針篩選稻瘟菌基因組TAC文庫獲得9個(gè)陽性克隆,從陽性克隆上得到包含完整基因的片段將用于構(gòu)建互補(bǔ)載體,通過互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明質(zhì)粒插入位置右側(cè)的基因是