鉬對(duì)小鼠腎小管和骨骼肌損傷及細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：中國(guó)洛陽(yáng)作為亞洲重要鉬礦開(kāi)采地，富含大量鉬元素的土壤會(huì)對(duì)當(dāng)?shù)氐哪敛?、家畜產(chǎn)生一定的影響，并且通過(guò)食物鏈的富集作用引起動(dòng)物Mo中毒，因此研究Mo對(duì)動(dòng)物的影響就顯得尤為必要。鉬作為動(dòng)物體必需的微量元素，在動(dòng)物機(jī)體的生長(zhǎng)和代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。機(jī)體攝入過(guò)量的鉬可導(dǎo)致鉬中毒的發(fā)生，從而對(duì)動(dòng)物體的免疫功能、泌尿功能和生殖功能等造成損傷。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于鉬中毒的研究主要集中于動(dòng)物體的免疫和生殖系統(tǒng)的研究，而關(guān)于 Mo對(duì)體外培養(yǎng)小鼠骨骼肌

2、細(xì)胞（SMC）和腎小管上皮細(xì)胞（RTEC）的毒性影響卻未見(jiàn)報(bào)道。
　　方法：本試驗(yàn)選用3日齡健康小鼠，無(wú)菌取出小鼠腎臟和骨骼肌組織進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后，向細(xì)胞添加含Mo無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h， Mo的最終濃度分別為0、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L。倒置顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)變化；MTT法測(cè)定 Mo對(duì)細(xì)胞活力的影響；用試劑盒測(cè)定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）、總抗氧

3、化能力（T-AOC），同時(shí)測(cè)定培養(yǎng)基內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）含量；采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)，對(duì)骨架蛋白α-肌動(dòng)蛋白（α-actin）、β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA的表達(dá)進(jìn)行測(cè)定；采用免疫印記技術(shù)（Western Blot），對(duì)骨架蛋白α-actin、β-actin和 Vimentin蛋白含量的變化進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：1.通過(guò)細(xì)胞形態(tài)觀(guān)察得出，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.4、0.8 mmol

4、/L時(shí)會(huì)導(dǎo)致小鼠腎小管上皮細(xì)胞間隙增大，且細(xì)胞生長(zhǎng)緊縮且細(xì)長(zhǎng)，輪廓逐漸模糊，少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)畸形；當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)基中 Mo濃度為0.2、0.4、0.8 mmol/L時(shí)會(huì)導(dǎo)致小鼠骨骼肌細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，細(xì)胞間隙增大，且細(xì)胞形狀隨 Mo濃度的升高，細(xì)胞凸起、輪廓明顯，并有少量細(xì)胞出現(xiàn)畸形。
　　2.細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.8mmol/L時(shí)，小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞的活力明顯受到抑制。
　　2.細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.4、0.8mmol

5、/L時(shí)，可以引起小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞的抗氧化能力下降，受到氧化損傷。
　　3.細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.8mmol/L時(shí)，原代小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞骨架蛋白α-actin，β-actin，Vimentin mRNA和蛋白合成受到抑制。
　　結(jié)論：本試驗(yàn)從細(xì)胞形態(tài)學(xué)、氧化損傷和細(xì)胞骨架損傷方面，初步探討了鉬中毒對(duì)于骨骼肌細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞的損傷機(jī)理，證實(shí)了高劑量的 Mo能夠引起小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞氧