玉米ZmCIPK8基因在逆境脅迫下的功能分析.pdf

1、本研究以玉米“鄭丹958”為材料，利用生物信息學和半定量RT-PCR方法，對玉米中5個ZmCIPKs基因在干旱，鹽和ABA等處理下的表達模式做了研究，并克隆了ZmCIPK8基因全長，通過轉基因手段，對其功能做了初步分析。在我們實驗室前期研究工作的基礎上，我們篩選出5個ZmCIPKs基因做進一步研究，主要研究結果如下：
　　 1、在干旱脅迫下，ZmCIPK1的表達量，葉中逐漸升高，而根中先升高后下降，4℃下則表達量變化不大；ZmC

2、IPK3在葉中逐漸升高，根中幾乎無表達，4℃處理后則根中有表達，而葉中沒有表達；ZmCIPK8在正常生長條件的玉米葉和根中均有一定量的基礎表達，且在葉中變化明顯。ZmCIPK8受鹽、冷和PEG的誘導表達，而不受ABA誘導；ZmCIP17干旱處理下的表達與ZmCIPK1基本一致，而4℃脅迫后表達量大量增加；ZmCIPK18主要受干旱脅迫誘導表達，根和葉中均有表達，4℃處理后則主要集中在根中表達。進一步比較發(fā)現，ZmCIPK8受干旱脅迫影響

3、顯著。
　　 2、ZmCIPK8基因的克隆與序列分析，利用PCR的方法，克隆得到ZmCIPK8全長cDNA，利用在線工具(http：//www.plantgdb.org)分析ZmCIPK8基因組中含有14個外顯子和14個內含子，蛋白結構上具有CIPK所共有的N端激酶結構域和C端NAF結構域。
　　 3、同時利用PCR方法得到了ZmCIPK8的啟動子序列，對ZmCIPK8啟動子序列內的順式作用元件進行預測分析，該基因啟動子

4、區(qū)域具有光應答、脅迫應答、發(fā)育相關、激素相關及其它功能未知的調控結構域。目前正開展以GUS為報告基因，通過轉基因方法研究ZmCIPK8啟動子的功能。
　　 4.利用已克隆的玉米ZmCIPK8基因構建了植物過量表達載體pBI21一ZmCIPK8，通過根癌農桿菌介導，轉化煙草，利用抗性篩選及PCR擴增鑒定陽性植株，并從mRNA水平上驗證ZmCIPK8的轉錄表達情況?？鼓嫦嚓P生理生化指標葉綠素，超氧化物歧化酶，丙二醛，脯氨酸等測定結果