熒光假單胞菌Pseudomonas fluorescens P-72-10菌株對煙草黑脛病的生防機理研究.pdf

1、西南大學博士學位論文熒光假單胞菌PseudomonasfluescensP7210菌株對煙草黑脛病的生防機理研究姓名：董國菊申請學位級別：博士專業(yè)：植物病理學指導教師：周常勇20120605西南大學博士學位論文菌化，該突變菌株能成功地定殖于煙草幼苗的根部，其在根部的定殖動態(tài)呈現(xiàn)為先上升后下降的趨勢；種子萌發(fā)出苗28天后，在煙草幼苗的根部仍能檢測到P7210：Rif菌株，其定殖量維持在104cfl噸這一穩(wěn)定的水平。掃描電鏡定性觀察發(fā)現(xiàn)P7

2、210：Rif菌株在煙草幼苗根表不同部位的定殖分布呈現(xiàn)宏觀不均勻性，根基部分布的菌體數(shù)量多于根中部，而根尖部分的細菌菌體數(shù)量最少。P一72—10菌株對煙草的促生效果及作用機制煙草種子經(jīng)P7210菌株不同濃度的培養(yǎng)液浸種處理后，能促進幼根的伸長，其中，以101濃度促生效果最好，根長為053cm，而對照根長為O47cm，與對照相比，增加了1276％，且差異顯著妒005)；且種子的可溶性蛋白含量增加，總淀粉酶活性升高。培養(yǎng)液灌根處理煙草幼苗后

3、，也能促進幼苗的生長及對N、P、K的吸收；增強光合效率、提高葉綠素含量；幼苗中丙二醛的積累量降低，與煙草植株抗性相關(guān)的防御酶(PPO、POD、PAL、幾丁質(zhì)酶和p1，3葡聚糖酶)活性升高，而各種防御酶活性的變化趨勢不一致，其活性高峰出現(xiàn)時間與數(shù)量也有差異。P72lO菌株的鑒定該菌株在King’sB培養(yǎng)基上菌落呈乳白色，且能產(chǎn)生水溶性的黃綠色熒光色素：為革蘭氏陰性細菌，菌體桿狀、大小(81162)(18—48)pm，單端生鞭毛，不形成芽孢

4、。其最適生長溫度為30℃；不耐鹽；能利用檸檬酸鹽和丙酸鹽。接觸酶反應陽性，氧化酶反應陽性，精氨酸雙水解酶反應陽性，苯丙氨酸脫羧酶反應陰性，脂酶反應陰性，硝酸鹽還原反應陰性：水解明膠和酪氨酸，但不水解淀粉；_能發(fā)酵葡萄糖、木糖和甘露醇。該菌株基因組DNA的(GC)m01％含量為6072mol％，16SrDNA基因序列分析顯示該菌株與假單胞菌屬的熒光假單胞菌多個菌株的序列同源性達到99％，在Gel1Ballk上的登陸號為：HQ888871。

5、因此，該菌株鑒定為熒光假單胞菌nPz比如肌冊甜艦Dr甜cP，2s。P7210菌株搖瓶培養(yǎng)條件的優(yōu)化搖瓶培養(yǎng)條件下，當pH為70、培養(yǎng)時間達52h、培養(yǎng)溫度為25℃時，P7210菌株在標準發(fā)酵培養(yǎng)基中能獲得最大量的抗菌物質(zhì)，且其抑菌活性最高；該菌株的抗茵物質(zhì)不能長時間地耐受高溫處理。正交試驗表明該菌株在搖瓶培養(yǎng)條件下獲得抗菌物質(zhì)的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組分配比為：葡萄糖23g，硫酸銨20g，硝酸鉀55g，氯化鈉O5g，蒸餾水looOmL，pH為7