松材線蟲攜帶熒光假單胞菌分泌毒蛋白的純化及致病機(jī)理研究.pdf

1、松材線蟲病是松屬樹種的一種毀滅性病害,主要由松褐天牛傳播,可危害多種松屬植物.由于其發(fā)生和發(fā)展涉及到松樹寄主、媒介昆蟲、松材線蟲、相關(guān)的微生物以及環(huán)境條件等多種因素,而這些因素之間相互構(gòu)成了復(fù)雜的關(guān)系,故給致病機(jī)理的研究和防治工作增加了難度.本文以松材線蟲攜帶的熒光假單胞菌為材料,從該茵的培養(yǎng)液中分離鑒定了其分泌的一種毒蛋白,并對(duì)其對(duì)黑松的毒性進(jìn)行了研究,以期為松材線蟲病的致病機(jī)理研究提供參考. 經(jīng)過硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-Se

2、pharoseFF離子交換層析、Seperdex-75凝膠過濾層析等方法從松材線蟲攜帶熒光假單胞菌的LB培養(yǎng)液中分離純化出一種分子量為50 kDa的蛋白,N-末端序列為:ALSVNTNITS,同源性分析表明,該蛋白是鞭毛蛋白,體外該蛋白對(duì)黑松幼苗和懸浮細(xì)胞具有很強(qiáng)的毒性.該蛋白能改變黑松懸浮細(xì)胞膜的通透性,導(dǎo)致胞內(nèi)可溶性糖和游離氨基酸的外滲,并導(dǎo)致胞內(nèi)外過氧化物酶活性升高和新的同工酶的出現(xiàn).此外,免疫細(xì)胞熒光分析表明,鞭毛蛋白與黑松懸浮

3、細(xì)胞之間存在直接的相互作用.因此,推測(cè)松材線蟲攜帶的熒光假單胞菌在寄主松樹體內(nèi)可分泌毒蛋白,并參與了松材線蟲的致病過程. 本文還研究了離體情況下松材線蟲攜帶的致病菌熒光假單胞菌在LB、NB和PD三種培養(yǎng)基中的產(chǎn)毒情況.結(jié)果顯示,該菌體在LB和NB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)所得培養(yǎng)液的毒性較高,在PD培養(yǎng)基中幾乎不產(chǎn)毒素,其中LB培養(yǎng)液的毒性最高,且培養(yǎng)基的pH為7時(shí)培養(yǎng)液的毒性高于pH為5時(shí)的毒性. 體外人工合成了編碼該蛋白的基因f