松材線蟲(chóng)枯萎病疫木上的藍(lán)變菌研究.pdf

1、本文從浙江寧海及云南紫溪山采集感染松材線蟲(chóng)的馬尾松藍(lán)變木材和感染擬松材線蟲(chóng)的云南松藍(lán)變木材，針對(duì)松枯萎病疫木上的藍(lán)變菌進(jìn)行研究，研究其分類學(xué)、致病性，在主要對(duì)前兩種松樹(shù)分離的同時(shí)，分離了在大興安嶺采集的偃松樣品。3種樣品通過(guò)用培養(yǎng)基分離與木塊保濕分離2種方法從馬尾松、云南松、偃松木材中分離純化出679株真菌，經(jīng)變色實(shí)驗(yàn)篩選出21株藍(lán)變菌，通過(guò)形態(tài)及分子方法鑒定，確定此21株藍(lán)變菌菌株屬7屬11種藍(lán)變菌，包括Leptographium a

2、bietinum、Ophiostomaaenigmaticum、Leptographium aenigmaticum、Botryosphaeria obtusa、Pleosporaceaesp.1、 Phomopsis sp.1、 Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.2、Pleosporaceae sp.3、Botryodiplodia sp.、Sphaeropsis sp.。其中 L.abietinum、O

3、.aenigmatinum、L.aenigmaticum通過(guò)形態(tài)鑒定確定為中國(guó)新紀(jì)錄種。
　　將從3種松樹(shù)中所分離得到的藍(lán)變菌菌株進(jìn)行致病性測(cè)定，測(cè)試方法采用生測(cè)法，用培養(yǎng)3個(gè)月的木質(zhì)化的馬尾松苗木浸漬在搖培30d的藍(lán)變菌過(guò)濾菌液中，每隔12h觀察一次苗木變化情況，結(jié)果表明，L.abietinum致病性最強(qiáng)，5d可使馬尾松苗木整株枯萎，其次是O.aenigmatinum、L.aenigmatinum，其它菌株對(duì)馬尾松苗木也存在不同

4、程度的致病性，而B(niǎo).obtusa、Pleosporaceae sp.2、Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.3幾乎無(wú)致病性，在30d內(nèi)馬尾松苗木與對(duì)照相比幾乎無(wú)變化。
　　針對(duì)致病性最強(qiáng)的菌株L.abietinum研究其生物學(xué)特性及致病機(jī)理。生物學(xué)特性結(jié)果表明，在PDA培養(yǎng)基上，菌絲生長(zhǎng)最適條件，溫度為25℃，黑暗，pH為5.9，最適碳源為蔗糖，最適氮源為硝酸鉀;最適產(chǎn)孢條件，溫度為25℃，黑暗，pH為

5、7.0，最適碳源為蔗糖，最適氮源為尿素。在生物學(xué)特性研究結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行致病機(jī)理測(cè)定。以Czapek's瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，將氮源硝酸鉀替換為尿素，接入L.abietinum菌種，搖培30d后，過(guò)濾培養(yǎng)液，對(duì)過(guò)濾液進(jìn)行熱穩(wěn)定性測(cè)定，同時(shí)用茚三酮、FeCI3、CaCI23種試劑測(cè)定過(guò)濾液中主要致病物質(zhì)，結(jié)果表明過(guò)濾液具有熱不穩(wěn)定性，其中含有蛋白質(zhì)類物質(zhì)和糖蛋白，進(jìn)一步確定實(shí)驗(yàn)證明L.abietinum可以產(chǎn)生毒素，其毒素中的致病物質(zhì)為蛋白質(zhì)