PI3K-Akt在雌激素調(diào)節(jié)仔豬睪丸支持細(xì)胞Skp2表達(dá)中的作用機(jī)制.pdf

1、睪丸支持細(xì)胞(Sertolicell,SC)為生精細(xì)胞的分化成熟提供激素、脂類、維生素等多種營養(yǎng)物質(zhì);與生精細(xì)胞共同構(gòu)成睪丸曲細(xì)精管的主要組織結(jié)構(gòu)。SC與生精細(xì)胞數(shù)量比例保持恒定是生精細(xì)胞分化的一個(gè)重要條件,SC的數(shù)量決定了成年動(dòng)物睪丸產(chǎn)生精子的數(shù)量。SC的增殖受多種因素的調(diào)節(jié),在所有影響的激素和因子中。Skp2是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的關(guān)鍵性因子,Skp2能與發(fā)生泛素化的p27kip1結(jié)合,促使p27kip1在26S的蛋白酶體上發(fā)生降解,促進(jìn)細(xì)

2、胞增殖。
　　 大量的研究表明,雌激素在睪丸支持細(xì)胞增殖中發(fā)揮了重要作用,而PI3K/Akt參與了細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié),研究PI3K/Akt在雌激素調(diào)節(jié)睪丸支持細(xì)胞增殖中的作用機(jī)制有利于闡明支持細(xì)胞增殖的機(jī)制。本研究的目的是,確定雌激素是否通過PI3K/Akt信號通路調(diào)節(jié)體外培養(yǎng)條件下未成熟仔豬睪丸支持細(xì)胞中Skp2蛋白和mRNA以及CyclinE1mRNA,CyclinD1mRNA的表達(dá)。
　　 本研究以培養(yǎng)的仔豬睪丸支持細(xì)

3、胞為實(shí)驗(yàn)材料,通過添加雌激素受體抑制劑以及多種信號通路的抑制劑,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期數(shù)量的變化,westernblot檢測Skp2、p27kip1、PCNA蛋白含量,并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Skp2mRNA、CyclinE1mRNA、CyclinD1mRNA的相對表達(dá)量。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):
　　 (1)濃度為10-9mol/L的17β-雌二醇是促進(jìn)SC細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)換的最佳濃度
　　 (2)17

4、β-雌二醇(10-9mol/L)以時(shí)間依賴的方式促進(jìn)了PI3K、Akt活性(P＜0.05),這一作用在30min時(shí)到達(dá)到高峰。
　　 (3)GPR30受體抑制劑G-15抑制了17β-雌二醇誘導(dǎo)的PI3K的表達(dá)(P＜0.05),受體激動(dòng)劑G-1促進(jìn)了PI3K的表達(dá)(P＜0.05)。
　　 (4)SRC抑制劑PP2抑制了17β-雌二醇誘導(dǎo)的PI3K的表達(dá)(P＜0.05)。
　　 (5)PI3K抑制劑LY294002抑

5、制了17β-雌二醇誘導(dǎo)的Akt的表達(dá)(P＜0.05)。
　　 (6)17β-雌二醇(10-9mol/L)促進(jìn)了Skp2蛋白、PCNA蛋白、CyclinD1mRNA和CyclinE1mRNA的表達(dá)(P＜0.05),但是卻能降低p27Kip1蛋白的表達(dá)量。而LY294002和Akt抑制劑10-DEBC都抑制了17β-雌二醇(10-9mol/L)的活性(P＜0.05),但兩種抑制劑單獨(dú)作用時(shí)對Skp2蛋白、CyclinD1mRNA和C