豬瘟病毒四種不同抗原卵黃抗體中和效力評(píng)價(jià).pdf

1、豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一種急性、接觸性傳染病。臨床表現(xiàn)為高熱和全身多發(fā)性小點(diǎn)出血，以內(nèi)臟器官多發(fā)性出血、梗塞和壞死為主要病理特征。該病流行廣泛，發(fā)病率和死亡率高，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。有人曾經(jīng)用干擾素、中草藥制劑來(lái)預(yù)防及治療豬瘟，但均未取得成功。目前，對(duì)該病的預(yù)防主要采用免疫接種豬瘟兔化弱毒疫苗，但接種豬瘟疫

2、苗后經(jīng)常出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象，不能對(duì)豬瘟進(jìn)行全面有效的預(yù)防。卵黃抗體作為一種高效生物制劑在傳染病的緊急預(yù)防中顯示出了明顯的效果，也為該病的緊急預(yù)防開辟了新的途徑。
　　 本研究克隆了豬瘟病毒E2基因中抗原指數(shù)較高且含有中和性抗原域的A1/A2區(qū)以及B、C區(qū)中抗原性較高的一段區(qū)域，該區(qū)域位于E2基因上754～880氨基酸殘基位置，命名為tE2，又合成了兩段豬瘟病毒線性中和表位核苷酸序列，表位CKEDYRYAISSTNEIGLLGAG

3、GLT位于E2基因上693～716氨基酸殘基位置，命名為P1，表位QTAVSPTTLRTEVVK位于E2基因上828～842氨基酸殘基位置，命名為P2。利用同尾酶串聯(lián)技術(shù)將P1和P2兩個(gè)中和表位分別在克隆載體pUC57上，重復(fù)串聯(lián)4次，酶切后連接表達(dá)載體在大腸桿菌中表達(dá)，分別獲得了具有中和抗原表位的tE2重組蛋白、4P1和4P2串聯(lián)重組蛋白，經(jīng)Western blot鑒定均具有抗原性。將上述3種重組蛋白和豬瘟活疫苗分別用白油佐劑混合乳化

4、，分組免疫9月齡海蘭蛋雞，共進(jìn)行3次免疫，每次間隔兩周。其中，tE2重組蛋白免疫組的一免劑量為0.50mg/只，二免劑量為1.00mg/只，三免劑量為1.50mg/只；4P1和4P2串聯(lián)重組蛋白免疫組一免劑量均為0.40mg/只，二免劑量為0.60mg/只，三免劑量為0.80mg/只；豬瘟活疫苗免疫組三次免疫的劑量均為10頭份/只。
　　 二免后一周開始收蛋，用氯仿法抽提卵黃抗體，用建立的間接ELISA法檢測(cè)抗體效價(jià)。以豬瘟活疫

5、苗和tE2重組蛋白作為免疫原獲得的卵黃抗體用tE2重組蛋白作為包被抗原，ELISA效價(jià)最高值分別為1:1024和1:4096；以4P1重組蛋白作為免疫原獲得的卵黃抗體用4P1重組蛋白作為包被抗原，ELISA效價(jià)最高值為1:4096；以4P2重組蛋白作為免疫原獲得的卵黃抗體用4P2重組蛋白作為包被抗原，ELISA效價(jià)最高值為1:1024。體外免疫熒光中和試驗(yàn)結(jié)果顯示，抗豬瘟活疫苗卵黃抗體、抗tE2重組蛋白卵黃抗體、抗4P1重組蛋白卵黃抗體

6、和抗4P2重組蛋白卵黃抗體均可不同程度中和豬瘟病毒。其中，抗豬瘟活疫苗卵黃抗體和抗4P1重組蛋白卵黃抗體中和作用相對(duì)較強(qiáng)，抗體和病毒混合后接種PK-15細(xì)胞，培養(yǎng)24h和48h進(jìn)行免疫熒光試驗(yàn)均無(wú)特異性熒光出現(xiàn)；而抗tE2重組蛋白卵黃抗體和抗4P2重組蛋白卵黃抗體和病毒混合后接入PK-15細(xì)胞，在24h和48h進(jìn)行免疫熒光試驗(yàn)均有少量特異性熒光出現(xiàn)，但明顯少于陽(yáng)性接毒對(duì)照出現(xiàn)的熒光數(shù)量。兔體中和試驗(yàn)結(jié)果顯示，抗豬瘟活疫苗卵黃抗體和抗4P