Jiv蛋白對(duì)豬瘟病毒復(fù)制的作用及豬瘟病毒C株感染性克隆的構(gòu)建.pdf

1、豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）與牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viraldiarrhea virus，BVDV)同為黃病毒科（Flaviviridae）瘟病毒屬（Pestivirus）的重要成員。CSFV的持續(xù)性感染是豬瘟難以根除的原因之一，對(duì)CSFV致病機(jī)理的闡明是制定有效防控措施的前提和基礎(chǔ)。病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制增殖，除了自身編碼一些必需蛋白外，還需要宿主細(xì)胞多種成分的協(xié)助。分子伴侶

2、（Molecular chaperone）是協(xié)助細(xì)胞在正常和脅迫條件下保持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要蛋白組分，并參與許多細(xì)胞生理反應(yīng)過程。J-結(jié)構(gòu)蛋白(J-domain protein interacting with viral protein，Jiv)是屬于熱休克蛋白40家族(Heat-shock proteins40，HSPs40)的分子伴侶，在BVDV的感染和致病中發(fā)揮著重要作用。CSFV與BVDV的相關(guān)研究資料可相互借鑒。BVDV在自然

3、界中有兩種不同的表現(xiàn)型，其中有宿主Jiv基因嵌合的毒株具有致細(xì)胞病變(CPE)的特性。這種現(xiàn)象也出現(xiàn)在CSFV的研究當(dāng)中。BVDV的研究發(fā)現(xiàn)Jiv蛋白主要通過促進(jìn)NS2-3蛋白的切割進(jìn)而促進(jìn)病毒的復(fù)制。
　　本研究驗(yàn)證了Jiv蛋白核心區(qū)對(duì)CSFV復(fù)制的影響及其與病毒蛋白的相互作用，為篩選Jiv重組病毒的嵌合片段奠定基礎(chǔ)。此外，克隆獲得了CSFV C株全基因組cDNA，構(gòu)建了C株的感染性克隆并進(jìn)行了病毒的初步拯救。研究獲得以下結(jié)果:

4、
　　1.通過構(gòu)建Jiv蛋白核心區(qū)段的過表達(dá)和干擾質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞內(nèi)Jiv進(jìn)行過表達(dá)和干擾，驗(yàn)證了Jiv蛋白在CSFV復(fù)制中的促進(jìn)作用。通過Co-IP的方法驗(yàn)證了Jiv蛋白與CSFV蛋白的相互作用。
　　2.根據(jù)CSFV AF531433毒株的全基因組序列設(shè)計(jì)引物，利用RT-PCR及重疊延伸PCR的方法擴(kuò)增獲得覆蓋全基因組的8個(gè)片段。在基因組的5'端分別引入T7啟動(dòng)子序列及CMV啟動(dòng)子、核酶序列，在其3'端分別引入線性化酶切位點(diǎn)、