煙草炭疽病菌的分子檢測與煙草品種抗病性研究.pdf

1、煙草是山東省重要的經濟作物之一，該病害一直是影響烤煙優(yōu)質穩(wěn)產的重要限制因素。煙草炭疽病是煙草的重要的侵染性病害，此病在煙草各生育期皆可發(fā)生，但以苗期發(fā)生普遍而嚴重。幼苗葉片病斑密布，嚴重發(fā)病時往往使整片煙苗毀掉。在防治煙草炭疽病方面，目前在生產上主要采用農業(yè)防治和藥劑防治。缺乏特效的藥劑和抗性品種，本研究對山東省主產煙區(qū)采集到得煙草炭疽病菌進行了分離鑒定和分子生物學檢測，并對17個煙草種質資源進行了煙草炭疽病的抗性鑒定。為煙草炭疽病的診

2、斷和防治提供了理論基礎，為抗病育種的了提供科學依據。本研究主要得到以下結果：
　　 1.煙草炭疽病的病原鑒定：通過癥狀觀察、病原物的分離、致病性測定、形態(tài)學觀察和5.8SrDNA－ITS序列分析，我們鑒定出山東主產煙區(qū)煙草炭疽病病原菌為毀滅炭疽菌(Colletotrichum destructivum O'Gara)。病原菌菌落為圓形，起初為灰白色，后期顏色稍深，分生孢子盤黑褐色，著生身生孢子梗和剛毛；剛毛很褐色，散生，有分割；

3、分生孢子為長圓筒形兩端鈍圓，單胞，無色。根據ITS rDNA構筑供試菌株與其他炭疽菌屬真系統(tǒng)進化樹中與毀滅炭疽菌聚于同一分支。
　　 2.建立了一套快速、高效的檢測鑒定煙草炭疽病菌的PCR方法。本研究以采自山東煙區(qū)的煙草炭疽病菌為目的菌株，提取基因組DNA，設計了一對特異引物Co1/Co2用于C.destructivum的分子檢測。利用該引物對包括C.destructivum在內的13個煙草病原菌菌株的基因組DNA進行PCR擴增

4、，結果表明：只有C.destructivum能擴增到特異性條帶，其它菌株及陰性對照均無擴增產物。對煙草組織和土壤的檢測結果也表明，該對引物能特異性的檢測到C.destructivumm基因組DNA的存在。該引物對C.destructivum基因組DNA檢測的靈敏度為0.01pg/μL。
　　 3.對來自田間的土壤樣品進行了實際檢測，證明了所建立的PCR檢測體系是穩(wěn)定可靠的。分別檢測體系對來自山東蒙陰、沂水、莒縣等地8個田間土壤樣

5、品進行實際檢測，結果與田間發(fā)病情況基本一致，證明所建立的PCR檢測體系是穩(wěn)定可靠的。
　　 4.通過采用不同的接種濃度和接種苗齡等對煙草品種對煙草炭疽病的苗期抗病性進行了測定，對其表現進行比較，篩選出一套適用于煙草苗期的快速準確的抗病性鑒定方法。煙草炭疽病苗期抗病性鑒定，采用1×108cfu/mL的病原菌懸浮液，在苗齡六周期進行噴霧接種，能較好地表現發(fā)病情況，接種后第9天調查發(fā)病情況，能夠反映不同材料對炭疽病的抗病性差異。