煙草青枯病菌的分子檢測與煙草品種抗病性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、煙草青枯病是是由青枯勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum E.F.Smith)引起的以土壤傳播為主的細菌病害,該病分布范圍廣、危害大,成為煙草生產(chǎn)上的一大毀滅性病害,給煙草生產(chǎn)帶來巨大損失。煙草青枯病是典型的維管束病害,病菌多從根部侵入,根、莖、葉各部均可受害,最典型癥狀是枯萎,在田間,青枯病常常與煙草黑脛病、根結(jié)線蟲病等病害混合發(fā)生,使為害更加嚴重。在防治青枯病的為害方面,目前生產(chǎn)上主要采用農(nóng)業(yè)防治、藥劑防治和生物防

2、治的方法,但效果均不顯著,缺乏特效的藥劑和抗性品種,從長遠來看,選育抗病品種才是控制煙草青枯病為害的根本出路。在發(fā)病前快速、準確地檢測田間土壤中R.solanacearum的數(shù)量也是有效預(yù)防青枯病發(fā)生的策略之一。因此,本研究通過對煙草青枯病病菌的分子檢測和品種的抗性鑒定,為青枯病的早期診斷和防治提供理論基礎(chǔ),對保障煙草的穩(wěn)產(chǎn)優(yōu)質(zhì)和持續(xù)發(fā)展具有重要意義。主要研究結(jié)果如下:
   1.建立了一套快速、高效的檢測鑒定煙草青枯病菌的PC

3、R 方法。本研究以采自山東煙區(qū)的煙草青枯病菌為目的菌株,提取基因組DNA,設(shè)計了一對特異引物RS-1/RS-2用于R.solanacearum的分子檢測。利用該引物對包括R.solanacearum 在內(nèi)的12個煙草病原菌菌株的基因組DNA 進行PCR 擴增,結(jié)果表明:只有R.solanacearum能擴增得到290bp的特異性條帶,其它菌株及陰性對照均無擴增產(chǎn)物。對煙草組織和土壤的檢測結(jié)果也表明,該對引物能特異性地檢測到R.solan

4、acearum基因組DNA的存在。該引物對R.solanacearum基因組DNA 檢測的靈敏度為100fg/μL。
   2.分別對來自山東蒙陰、沂水、莒縣等地12個田間土壤樣品進行實際檢測,結(jié)果與田間發(fā)病情況一致。
   3.采用不同的接種濃度和接種苗齡等對煙草青枯病苗期抗病性進行了測定,篩選出一套適用于煙草苗期的快速準確的抗病性鑒定方法。煙草青枯病苗期抗病性鑒定,采用1×108 cfu/mL的病原菌懸浮液,在苗齡六

5、周進行傷根灌菌液接種,接種后第30天調(diào)查發(fā)病情況,能夠反映不同材料對青枯病的抗病性差異。
   4.對24個煙草品種進行了青枯病的抗性鑒定,結(jié)果表明,供試品種均未表現(xiàn)免疫反應(yīng),不同煙草品種的抗病性有一定的差異。品種RG17 抗病性最好,病情指數(shù)為26.11,中抗占20.8%,中感占54.2%,高感占25.0%。5.在24 份煙草材料中選取不同抗性級別的材料4 份,分別進行青枯病病原菌的接種處理,以無菌水為對照,測定接種后植株葉片

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