白菜種傳黑斑病菌分子鑒定及抑菌藥劑初探.pdf

1、該文以來自國內(nèi)外的白菜黑斑病菌為研究材料,進行了基本培養(yǎng)條件的比對研究和5.8s rDNA及其側(cè)翼ITS區(qū)的克隆、測序、序列變異及系統(tǒng)進化關(guān)系的分析,建立了白菜黑斑病菌蕓薹鏈格孢(Alternaria brassicae)、甘藍鏈格孢(A.brassicicola)及蘿卜鏈格孢(A.japonica)三個種的分子鑒定方法;根據(jù)白菜生產(chǎn)中黑斑病防治的需要,進行了14種殺菌劑抑制黑斑病菌菌絲生長效果的比較研究.試驗獲得到了以下結(jié)果.黑斑病菌

2、及其近緣種真菌核糖體5.8s rDNA及其側(cè)翼ITS區(qū)序列比對結(jié)果顯示,不同種菌株ITS1比ITS2在堿基構(gòu)成上有更大的變異,而且ITS1的序列長度變異比ITS2的大:而種內(nèi)雖然各菌株的寄主和地理來源不同,但ITS1和ITS2在長度上均沒有變異,堿基構(gòu)成上存在微小的變異.對該區(qū)序列的系統(tǒng)聚類分析表明,白菜黑斑病菌三個種雖然地理來源和寄主不同,但種內(nèi)的不同菌株均在一個獨立的聚類組中,而且和鏈格孢屬內(nèi)其它種在聚類關(guān)系上明顯分開,可基于該區(qū)進

3、行黑斑病菌的分類鑒定.設(shè)計合成了進行白菜黑斑病菌三個種鑒定三對特異性引物,PCR鑒定檢測結(jié)果表明:Abre1(AGGCTGAAATCTCTCGAGACGA)和Abre2(AAGGCGAGTCTCCAGCAAACTA)引物對能特異性擴增蕓薹鏈格孢的371bp的片段,Abra1(ACCTCAGCAGCATCTGCTGTTG)和Abra2(GGCTTTATGGATGCTGACCTTG)引物對能特異性擴增甘藍鏈格孢的457bp片段,Ajap1(

4、AGCAGTGCATTGCTTTACGGCG)和Ajap2(CCAGTAGGCCGGCTGCCAATT)引物對能特異性擴增蘿卜鏈格孢411bp的片段,而且其它近源種未擴增出目標片段,說明這三對引物可以作為白菜黑斑病菌三個種鑒定的分子特征標記.檢測表明,PDA是白菜黑斑病菌三個種5個菌株營養(yǎng)生長的最適培養(yǎng)基,菌落直徑可以作為區(qū)分三個種的參考指標.白菜黑斑病菌三個種蕓薹鏈格孢、甘藍鏈格孢和蘿卜鏈格孢菌株最適生長溫度20-25℃,甘藍鏈格孢和

5、蘿卜鏈格孢菌株菌絲生長溫度和原有報道相比提高了5℃;蕓薹鏈格孢中國菌株菌絲生長pH范圍為4-8,其它所有供試菌株生長pH為3-11;24h光照、12h光暗交替和24h黑暗對蕓薹鏈格孢中國菌株和蘿卜鏈格孢菌株菌絲生長速率影響不大,其它菌株在24h光照和12h光暗交替下的生長速率比24h黑暗處理的顯著增大.14種殺菌劑對白菜黑斑病菌兩個優(yōu)勢種蕓薹鏈格孢和甘藍鏈格孢國內(nèi)外株系的生長抑制作用表明:同種但不同來源的病原菌對藥劑的敏感性有明顯差異,