拮抗冬棗黑斑病菌鏈霉菌的獲得及其產(chǎn)物活性研究.pdf

1、冬棗黑斑病是由細(xì)極鏈格孢(Alternaria tenuissima)引起的一種真菌性病害,嚴(yán)重制約著冬棗的產(chǎn)業(yè)發(fā)展。本文以沾化縣冬棗栽培區(qū)的根際土壤作為菌種的獲得來(lái)源,采用瓊脂塊法篩選出一株對(duì)冬棗黑斑病病原有著很好的抑菌效果的放線菌,并進(jìn)行了放線菌分類(lèi)鑒定,旨在為冬棗黑斑病生防藥物的開(kāi)發(fā)提供新的菌種。研究結(jié)果如下:
　　1、對(duì)山東沾化縣冬棗栽培區(qū)不同質(zhì)地、不同種植年限土壤微生物數(shù)量和養(yǎng)分狀況進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),沾化縣冬棗栽培區(qū)根際土壤

2、微生物總數(shù)明顯高于根外(非根際),呈現(xiàn)出明顯的根際效應(yīng)。并且隨著冬棗棗樹(shù)種植年限增加,微生物總數(shù)呈現(xiàn)增加趨勢(shì)。土壤中細(xì)菌數(shù)量最多,其次為放線菌和真菌,并且鏈霉菌種類(lèi)繁多。該地區(qū)砂質(zhì)土壤中微生物數(shù)量高于粘質(zhì)土壤,因?yàn)樯百|(zhì)土壤通風(fēng)性較好,有利于微生物生長(zhǎng)。
　　2、本實(shí)驗(yàn)共分離到520株放線菌。用瓊脂塊法進(jìn)行初步篩選,得到8株具有很好的廣譜抑菌性的放線菌,通過(guò)對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行抑菌活性測(cè)定,獲得了一株既具有廣譜抑菌性并且對(duì)沾化冬棗黑斑病病原

3、有顯著地抑菌性的放線菌,命名為K14,瓊脂塊法測(cè)得的對(duì)冬棗黑斑病致病菌的平均抑菌圈直徑達(dá)到30 mm。
　　3、采用多相分類(lèi)技術(shù)對(duì)拮抗放線菌K14進(jìn)行了分類(lèi)鑒定。將 K14初步鑒定為白黃鏈霉菌(Streptomyces alboflavus)。
　　4、采用單因素和正交試驗(yàn)相結(jié)合,對(duì)放線菌K14的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化。得出K14菌株的發(fā)酵最適培養(yǎng)基為:葡萄糖為3％磷酸氫二鈉為0.05％,氯化鈉為0.05％,硫酸

4、鎂為0.1％,玉米粉為2％,蛋白胨為0.1％,黃豆粉為4％,。最佳發(fā)酵工藝條件為:搖瓶裝液量為100mL,發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH7.5,培養(yǎng)溫度28℃,搖床轉(zhuǎn)速180r/min,發(fā)酵時(shí)間為144h。
　　5、對(duì)放線菌K14發(fā)酵液中的抑菌活性物質(zhì)的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。試驗(yàn)表明,菌株具有良好的遺傳穩(wěn)定性,傳代多次后仍然具有很高的抑菌活性。其活性產(chǎn)物具有較好的耐熱性和耐堿性,但是在酸性條件和紫外光照的環(huán)境下抑菌活性顯著降低。
　　6、對(duì)發(fā)