14828.兩株海洋來(lái)源鏈霉菌的分類鑒定及其活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究

1、博士學(xué)位論文兩株海洋來(lái)源鏈霉菌的分類鑒定及其活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究—弋●●J●一●l●11LnaraCterlZatlon0ltwomarine—derivedStreDtomVCeteSann1‘l‘■‘1■’‘studiesOntlleirbioactivesecondarVmetabolites學(xué)號(hào)：10807030完成日期：2013年9月大連理工大學(xué)DaliaJlUniversityofTechnology大連理工大學(xué)博士學(xué)位論

2、文摘要海洋鏈霉菌是多種新穎天然產(chǎn)物的重要來(lái)源。對(duì)海洋鏈霉菌進(jìn)行分離、鑒定及其活性次級(jí)代謝產(chǎn)物分離純化、結(jié)構(gòu)解析，有助于深入挖掘其獨(dú)特的基因資源和生物合成潛能，為開(kāi)發(fā)在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域迫切需要的藥物和先導(dǎo)化合物奠定基礎(chǔ)。微生物影像質(zhì)譜是近幾年來(lái)發(fā)展起來(lái)的研究微生物與環(huán)境、微生物細(xì)胞間次級(jí)代謝產(chǎn)物相互作用而產(chǎn)生的新技術(shù)，目前國(guó)內(nèi)相關(guān)的研究還較少。本課題組在大連周邊海域沉積物樣品中分離了幾百株海洋放線菌，但對(duì)其分類鑒定和活性化合物的研究還沒(méi)有

3、深入進(jìn)行。本研究針對(duì)其中的兩株放線菌S187和M10，分別從菌株的分類鑒定、活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的分離純化和結(jié)構(gòu)解析、發(fā)酵條件的優(yōu)化等幾個(gè)方面進(jìn)行了研究，并利用影像質(zhì)譜和基因組挖掘?qū)芍攴啪€菌產(chǎn)生的活性次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析預(yù)測(cè)，所取得的研究結(jié)果如下：1多相分類法鑒定菌株S187通過(guò)形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、細(xì)胞化學(xué)組分、16SrRNA序列分析及基因組DNADNA隨機(jī)雜交對(duì)菌株S187進(jìn)行分類鑒定。菌株S187與其近緣菌株Streptomyces

4、∥avofuscusNRRLB80361和SalbiaxialisDSM在培養(yǎng)特征、生理生化特征等均呈現(xiàn)明顯差異。DNADNA雜交試驗(yàn)表明，菌株S187同S加vD舳c娜和Salbiaxialis的相關(guān)性僅為314％和469％，因此，鑒定s187為鏈霉菌屬的新種，命名為星海鏈霉菌(Sxinghaiens&spnov)。星海鏈霉菌對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌等細(xì)菌測(cè)試菌具有良好的拮抗活性，具有潛在的開(kāi)發(fā)前景。2星海

5、鏈霉菌活性次級(jí)代謝產(chǎn)物研究對(duì)星海鏈霉菌在三種不同固體培養(yǎng)基TSB、A1和Marineagar上的純培養(yǎng)和瓊脂塊法抗菌活性測(cè)試影像質(zhì)譜分析，結(jié)果表明，星海鏈霉菌的次級(jí)代謝物中沒(méi)有有效的質(zhì)譜信號(hào)與抑菌圈完全吻合。以金黃色葡萄球菌為指示菌，通過(guò)乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、C18快速分離柱和半制備HPLC從25L星海鏈霉菌發(fā)酵液中分離得到兩個(gè)化合物xinghaiamineA和B。運(yùn)用質(zhì)譜、紅外光譜、紫外光譜和核磁共振(1H—NMR，13C—NMR

6、1HHcosy，HSQC，HMBC，DEPT135)等光譜方法對(duì)兩個(gè)化合物進(jìn)行表征，結(jié)構(gòu)解析確定xinghaiamineA為一種含亞砜官能團(tuán)的生物堿，文獻(xiàn)檢索確定其為一種新結(jié)構(gòu)化合物且其特征的亞砜結(jié)構(gòu)系首次從微生物中分離得到?？咕钚詼y(cè)試表明，xinghaiamineA和B具有廣譜抗細(xì)菌活性，且對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)具有較強(qiáng)的抑制作用，但對(duì)真菌沒(méi)有抑制作用。細(xì)胞毒活性表明，xinghaiamineA對(duì)四株人類腫瘤細(xì)胞均有一定的