萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因及其啟動(dòng)子的特征和在卵巢周年發(fā)育中的研究.pdf

1、萍鄉(xiāng)紅鯽(pingxiangred-transparentcruciancarp,carassiusauratusvar.Pingxiangnesis),通體透明,體呈肉紅色,是江西省萍鄉(xiāng)地區(qū)分布的一種天然三倍體野生鯽魚的突變種。在2008年被國(guó)家水產(chǎn)原、良種委員會(huì)審定為一個(gè)新的養(yǎng)殖品種。經(jīng)過連續(xù)多代人工選育,得到生長(zhǎng)速度快、適應(yīng)性強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、易養(yǎng)易繁、抗病力強(qiáng)等優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀,且遺傳性狀基本穩(wěn)定的后代。現(xiàn)已證實(shí)萍鄉(xiāng)紅鯽具有兩性生殖和

2、雌核發(fā)育兩種生殖方式。在對(duì)銀鯽、果蠅等一些生物的研究中,Hira基因在雌核發(fā)育中與精核解凝有關(guān)。實(shí)驗(yàn)從三個(gè)方面對(duì)萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因做了相關(guān)工作,以探討其在萍鄉(xiāng)紅鯽生殖調(diào)控中的作用。一、實(shí)驗(yàn)采用RACE-PCR技術(shù)克隆得到萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因cDNA全長(zhǎng),序列全長(zhǎng)為3851bp,開放閱讀框3033bp,編碼1010個(gè)氨基酸。通過氨基酸序列比對(duì),同源分析發(fā)現(xiàn)Hira基因存在較大的種屬特異性和穩(wěn)定性。萍鄉(xiāng)紅鯽HIRA蛋白與銀鯽、普通鯽魚及斑

3、馬魚的HIRA蛋白同源性較高,與兩棲類、爬行類、鳥類以及哺乳類動(dòng)物的HIRA蛋白同源關(guān)系較遠(yuǎn)。信號(hào)肽分析表明Hira基因無信號(hào)肽,推測(cè)HIRA蛋白可能為可溶性蛋白于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)或進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮功能,符合其作為組蛋白伴侶而行使調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的特性。二、利用GenomeWalker法進(jìn)行Hira基因啟動(dòng)子的步移,經(jīng)過2次步移,測(cè)序后MEGA軟件拼接得到啟動(dòng)子序列3.6kb。Proscan軟件分析表明在Hira基因翻譯起始位點(diǎn)ATG上游-1278

4、bp～-1035bp段可能為基因的強(qiáng)啟動(dòng)區(qū),含有1個(gè)TATA-BOX,1個(gè)CAATBOX,1個(gè)EBOX和一個(gè)POU1F1a,這些結(jié)構(gòu)域序列可能對(duì)于Hira基因的表達(dá),起到了重要的調(diào)控作用。三、利用熒光定量PCR方法檢測(cè)了Hira基因在萍鄉(xiāng)紅鯽自出苗后至性腺成熟的成體魚的卵巢組織中的表達(dá)變化情況。結(jié)果顯示,Hira基因在卵巢組織巾表達(dá)的周年內(nèi)總體表現(xiàn)為上升趨勢(shì),出苗后1～5月齡表達(dá)量較小,在第6月齡突然增加,相對(duì)量達(dá)到3月齡時(shí)的1947倍