玉米rbcS基因啟動(dòng)子的改造及其在轉(zhuǎn)基因植物中的初步應(yīng)用研究.pdf

1、為獲得葉片組織特異性表達(dá)強(qiáng)啟動(dòng)子,該實(shí)驗(yàn)克隆改造得到四個(gè)玉米rbcS基因啟動(dòng)子突變體.在啟動(dòng)子的GC富含區(qū)-118定點(diǎn)突變得到T→C的突變體并將其替換pBI121質(zhì)粒上的35S啟動(dòng)子構(gòu)建成新的載體pB2;在啟動(dòng)子的-31位置插入了一個(gè)八核苷酸片段并將其替換pBI121質(zhì)粒子的35S啟動(dòng)子構(gòu)建成新的載體pB8;用rbcS的5'端470bp片段與35S啟動(dòng)子構(gòu)建470bp+35S組合啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)的載體pB20;用GC富含區(qū)-118→C點(diǎn)突變得

2、到的突變體的3'端324bp與35S啟動(dòng)子構(gòu)建324bp+35S雙啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)載體pB13.另外,還用未經(jīng)濟(jì)修飾的rbcS啟動(dòng)子替換了35S啟動(dòng)子構(gòu)建了載體pB9,作為對(duì)照.在煙草原生質(zhì)體中對(duì)改造后的啟動(dòng)子表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行了瞬時(shí)表達(dá)的檢測(cè).測(cè)定結(jié)果表明pB13的雙啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出了最大的活性,是rbcS啟動(dòng)子的4倍,是35S啟動(dòng)子的1.4倍.pB20與p2表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)不大,都是rbcS啟動(dòng)子的3倍,是35S啟動(dòng)子的1.2倍.p8沒(méi)有明顯的增強(qiáng)