HIRA敲降對(duì)銀鯽胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、TheEffectofHIRAKnockdown0nEmbryogeneslsinblDelcarp__●■，一弋●1lAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMSDegreeinZoologyByWangMengyuPostgraduateProgramCollegeofLifeSciencesCentralChinaNormalUniversitySuper

2、visor：WangYufengAcademicTitle：ProfessorSignan，∞邊煎May2011⑨碩士學(xué)位論文MASTER‘STHESIS摘要雌核發(fā)育銀鯽因其獨(dú)特的生殖特點(diǎn)在魚(yú)類(lèi)發(fā)育生物學(xué)的研究中占有重要的地位。在銀鯽卵子發(fā)生的減數(shù)分裂過(guò)程中，有著不同于常規(guī)的機(jī)制，主要表現(xiàn)在：紡錘體異常、第一極體不發(fā)生外排等。而在其受精的過(guò)程中，也有著同源和異源精子不一樣的應(yīng)答機(jī)制：同源精子進(jìn)入卵子中后，精核可以解除濃縮狀態(tài)，參與到子代

3、的發(fā)育過(guò)程中去，后代產(chǎn)生一定比例的雄體；而異源精核受精時(shí)。精核完全不解凝，始終保持固縮狀態(tài)，不參與子代發(fā)育，后代全部為雌體。這些特有的繁殖方式，已經(jīng)使其成為研究生殖細(xì)胞發(fā)生和受精機(jī)制的極佳實(shí)驗(yàn)材料。近年來(lái)，關(guān)于組蛋白伴侶HIRA的研究較多集中于酵母、果蠅、小鼠等生物中，在魚(yú)類(lèi)中的研究比較少見(jiàn)。前人的研究表明，HIRA在發(fā)育過(guò)程中起著重要的作用，在果蠅中，Hira基因突變導(dǎo)致雌性不育，但不影響果蠅的存活。在小鼠中的研究表明，Hira基因缺

4、失會(huì)導(dǎo)致胚胎死亡。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)克隆了銀鯽Hira基因的全長(zhǎng)序列，檢測(cè)了Hira轉(zhuǎn)錄本在胚胎發(fā)育不同階段的表達(dá)情況。在此基礎(chǔ)上，又制備了銀鯽H1RA的多克隆抗體。隨后，又用原位雜交的方法檢測(cè)了Hira基因在銀鯽卵子發(fā)生各階段的動(dòng)態(tài)變化特征。體外精核解凝、免疫耗竭等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HIRA在銀鯽和彩鯽精核解凝過(guò)程中起關(guān)鍵作用。本研究在以前研究的基礎(chǔ)之上，首先探究了Hira基因在銀鯽卵子發(fā)生過(guò)程中的表達(dá)情況，以期初步了解其在卵子發(fā)生和早期胚胎發(fā)育時(shí)

5、的作用。然后又采用了Morpholino反義寡核苷酸技術(shù)對(duì)銀鯽Hira基因進(jìn)行敲降，觀察Hira基因敲降對(duì)銀鯽胚胎發(fā)育的影響，并通過(guò)石蠟切片、原位雜交等技術(shù)進(jìn)一步研究HIRA蛋白敲降對(duì)胚胎體內(nèi)造成的影響。本研究可進(jìn)一步豐富魚(yú)類(lèi)發(fā)育生物學(xué)的基礎(chǔ)研究資料，并為全面揭示HIRA在動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中的功能提供幫助。本研究結(jié)果表明，Hira基因從卵子發(fā)生的I期到Ⅳ期轉(zhuǎn)錄本逐步增加，與I期相比，Ⅳ期Hira基因的表達(dá)量顯著增加(尸o05)。用Weste

6、rnblot方法對(duì)HIRA蛋白表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果也與此基本一致。隨著卵母細(xì)胞的發(fā)育成熟，HIRA蛋白表達(dá)量逐漸增加，III期卵母細(xì)胞比I期就有顯著的增加(尸o05)，這表明，HIRA在銀鯽卵子發(fā)生過(guò)程中轉(zhuǎn)錄和翻譯的表達(dá)圖式上沒(méi)有明顯區(qū)別，也說(shuō)明母源性的Hira基因可能在銀鯽的卵子發(fā)生和早期胚胎發(fā)育中起重要作用。HIRA敲降導(dǎo)致胚胎出現(xiàn)了較為明顯的表型缺陷。主要表現(xiàn)在：原腸期胚胎胚盤(pán)下包緩慢；體軸縮短、尾部扭曲；循環(huán)系統(tǒng)障礙，圍心腔水腫，出現(xiàn)