微囊藻毒素對小鼠和金魚胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、微囊藻毒素(microcystins，MCs)是具有生物活性的環(huán)狀七肽肝毒素，作用的靶器官是肝臟，主要由銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosa)產(chǎn)生。它是一種細(xì)胞內(nèi)毒素，在細(xì)胞死亡裂解后釋放進(jìn)水體內(nèi)。近幾十年，國內(nèi)外關(guān)于微囊藻毒素危害野生動物、家畜、家禽的事件時有發(fā)生，同時，由有毒水華微囊藻或微囊藻毒素所引發(fā)的肝炎、肝癌及其它中毒事件也有一些報道。但是，微囊藻毒素能否通過母體而危害動物的胚胎，還需要進(jìn)一步深入的研究。本文

2、主要研究了微囊藻毒素對小鼠和金魚胚胎發(fā)育的毒性作用。 將采自河南省南灣水庫的銅綠微囊藻，通過分離獲得純種，然后進(jìn)行大量培養(yǎng)。收集藻漿，用沸水浴法提取微囊藻細(xì)胞抽提物。經(jīng)高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography，HPLC)分析，微囊藻細(xì)胞抽提物毒素含量為1.81mg/g干重培養(yǎng)物，其中MC-LR含量為1.79mg/g干重培養(yǎng)物，MC-YR含量為0.02mg/g干重培養(yǎng)物。采用小白鼠腹腔注

3、射法進(jìn)行毒性的生物測試，結(jié)果表明，南灣水庫銅綠微囊藻細(xì)胞抽提物的毒性較強(qiáng)，其LD50=31.20ug微囊藻毒素/kg體重。 將受孕的雌性小鼠隨機(jī)分成五組：三個實(shí)驗(yàn)組，一個陰性對照組和一個陽性對照組，每組12只孕鼠。實(shí)驗(yàn)組在受孕的第6-15天連續(xù)10天腹腔注射微囊藻毒素，注射劑量分別為12μg/kg(高劑量組)，6μg/kg(中劑量組)，3μg/kg(低劑量組)，陰性對照組注射等量的生理鹽水，陽性對照組于受孕第10天肌肉注射環(huán)磷酰

4、胺1次，注射劑量為10mg/kg。妊娠第18天將孕鼠處死，分析孕鼠體重變化及仔鼠胚胎發(fā)育指標(biāo)，檢查胎鼠有無外觀、內(nèi)臟和骨骼畸形，并取出胎鼠的心、肝、腎做病理切片觀察。結(jié)果顯示，與陰性對照組相比較，高劑量組和陽性對照組孕鼠體重變化、吸收胎率和死胎率及胎鼠發(fā)育的各項(xiàng)指標(biāo)均具有顯著性差異(P＜0.05)，中劑量組和低劑量組孕鼠體重變化無顯著性差異(P＞0.05)，胎鼠的各項(xiàng)發(fā)育指標(biāo)也未受明顯影響(P＞0.05)，這表明微囊藻毒素對孕鼠和胎鼠的

5、影響呈劑量-反應(yīng)關(guān)系。檢查胎鼠的外觀和骨骼發(fā)現(xiàn)，陽性對照組具有明顯的外觀畸形，而實(shí)驗(yàn)組僅在中劑量組發(fā)現(xiàn)胎鼠有4例卷尾，其它兩組未見明顯的畸形癥狀。觀察胎鼠心、肝、腎病理切片發(fā)現(xiàn)，肝臟呈點(diǎn)狀出血及重度或輕度水樣變性；腎臟腎小球發(fā)育不良，并伴隨有出血現(xiàn)象；心臟有輕微的點(diǎn)狀出血。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微囊藻毒素既表現(xiàn)出母體毒性，又表現(xiàn)出胚胎毒性。 在金魚胚胎發(fā)育的不同階段(剛受精后、卵裂期、原腸胚期、剛孵出后)，分別用不同劑量的微囊藻毒素(

6、0、1000、2000、3000、4000、5000μg/L)處理，結(jié)果顯示，微囊藻毒素對金魚胚胎有明顯的致畸作用，主要畸形癥狀是：胚體渾濁、模糊或自行解體；彎體、彎尾；孵化異常；卵黃吸收差或卵黃破裂從胚胎中逸出。這種致畸效應(yīng)具有胚胎發(fā)育的階段敏感性，卵裂期最敏感(EC50=2866.2μg/L)，其次是原腸胚期(EC50=3705.1μg/L)，剛受精后而未進(jìn)行卵裂時最不敏感(EC50=3873.9μg/L)。用微囊藻毒素處理剛孵出的