靚精對(duì)豬配子及胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、人工授精技術(shù)能夠降低豬養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)成本，從而提高經(jīng)濟(jì)效益，還可以通過(guò)推廣優(yōu)秀種公豬精液，加速品種改良。而精液的保存水平則是關(guān)乎人工授精技術(shù)效果的重要環(huán)節(jié)。目前，應(yīng)用廣泛的豬精液保存方法為常溫保存法，為了更好的提高種公豬利用效率，推動(dòng)人工授精技術(shù)的發(fā)展，豬精液的稀釋保存也就成了最關(guān)鍵的技術(shù)。
　　本實(shí)驗(yàn)主要研究藥物靚精添加至精液稀釋液中對(duì)于精子受精能力等指標(biāo)的影響，但首先需要觀察靚精對(duì)卵母細(xì)胞的影響，所以在卵母細(xì)胞成熟液M199中添

2、加0.5％、0.75％、1％三種不同濃度的靚精，將卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)1h后換至正常培養(yǎng)液中，最終與空白對(duì)照組進(jìn)行成熟率比較，結(jié)果通過(guò)DAPI染色發(fā)現(xiàn)，三種濃度的靚精對(duì)豬卵母細(xì)胞的成熟均無(wú)不良影響;接著對(duì)經(jīng)過(guò)含三種不同濃度靚精的成熟培養(yǎng)液培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞和空白對(duì)照組的卵母細(xì)胞進(jìn)行孤雌，比較卵裂率和囊胚率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵母細(xì)胞成熟期間添加不同濃度的靚精不會(huì)影響卵母細(xì)胞孤雌后的胚胎發(fā)育能力，隨后又通過(guò)囊胚TUNEL凋亡染色，發(fā)現(xiàn)囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡

3、細(xì)胞數(shù)在四組間也沒(méi)有顯著差異，進(jìn)一步說(shuō)明卵母細(xì)胞成熟期間添加靚精不會(huì)影響卵母細(xì)胞的后續(xù)胚胎發(fā)育能力。
　　之后在孤雌后的胚胎培養(yǎng)液PZM-3中加入相同的三種濃度的靚精，培養(yǎng)4h后全部換至正常胚胎培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，與空白對(duì)照組比較卵裂率、囊胚率以及染色后計(jì)算出的囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示卵裂率、囊胚率、囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)在四組間都沒(méi)有顯著差異，說(shuō)明胚胎在發(fā)育期間接觸這三種濃度的靚精不會(huì)影響胚胎的發(fā)育能力。
　　添

4、加相同的三種濃度靚精至精液稀釋液中，使用計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)(CASA)檢測(cè)經(jīng)精液稀釋液稀釋后的精液的活率、A級(jí)+B級(jí)精子比例、直線運(yùn)動(dòng)精子活率、精子平均直線運(yùn)動(dòng)速度(VSL)、精子平均側(cè)擺幅度(ALH)、精子運(yùn)動(dòng)直線性(LIN)、精子運(yùn)動(dòng)擺動(dòng)性(WOB)、精子運(yùn)動(dòng)前向性(STR)等指標(biāo)。分析后發(fā)現(xiàn)在30h時(shí)0.75％組的直線運(yùn)動(dòng)精子活率顯著高于1％組，而與其他兩組間無(wú)顯著差異。42 h時(shí)0.75％組的精子活率顯著高于對(duì)照組，而與0.

5、5％及1％兩組間沒(méi)有顯著差異;并且0.75％組的A+B級(jí)精子比例顯著高于對(duì)照組和0.5％組;而0.75％組的直線運(yùn)動(dòng)精子活率顯著高于其他三組。同時(shí)通過(guò)多因素方差分析和精子各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)隨時(shí)間變化的折線圖發(fā)現(xiàn)隨著存儲(chǔ)時(shí)間的延長(zhǎng)靚精添加濃度為0.75％的精子指標(biāo)如精子活率、A級(jí)和B級(jí)精子的比例、直線運(yùn)動(dòng)精子活率、精子平均直線運(yùn)動(dòng)速度(VSL)、精子平均側(cè)擺幅度(ALH)、精子運(yùn)動(dòng)直線性(LIN)、精子運(yùn)動(dòng)前向性(STR)等的變化幅度都比其他三

6、組的相對(duì)應(yīng)指標(biāo)的變化幅度小，綜合這些結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)含0.75％濃度靚精的精液稀釋液對(duì)于保存一定時(shí)間的精液的效果更佳。
　　使用含0.5％、0.75％和1％三種濃度靚精的精液稀釋液稀釋的精液和正常稀釋液稀釋的精液進(jìn)行體外受精，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是卵裂率、囊胚率還是囊胚總細(xì)胞數(shù)、凋亡細(xì)胞數(shù)，在四組間均無(wú)顯著差異，這一結(jié)果與精子數(shù)掘結(jié)合說(shuō)明含0.75％靚精的精液稀釋液能夠維持保存一定時(shí)間的精液的運(yùn)動(dòng)能力和活率，但是沒(méi)有提高體外受精的效果，而對(duì)于人工