靚精對豬配子及胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、人工授精技術(shù)能夠降低豬養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)成本，從而提高經(jīng)濟效益，還可以通過推廣優(yōu)秀種公豬精液，加速品種改良。而精液的保存水平則是關(guān)乎人工授精技術(shù)效果的重要環(huán)節(jié)。目前，應(yīng)用廣泛的豬精液保存方法為常溫保存法，為了更好的提高種公豬利用效率，推動人工授精技術(shù)的發(fā)展，豬精液的稀釋保存也就成了最關(guān)鍵的技術(shù)。
　　本實驗主要研究藥物靚精添加至精液稀釋液中對于精子受精能力等指標(biāo)的影響，但首先需要觀察靚精對卵母細(xì)胞的影響，所以在卵母細(xì)胞成熟液M199中添

2、加0.5％、0.75％、1％三種不同濃度的靚精，將卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)1h后換至正常培養(yǎng)液中，最終與空白對照組進行成熟率比較，結(jié)果通過DAPI染色發(fā)現(xiàn)，三種濃度的靚精對豬卵母細(xì)胞的成熟均無不良影響;接著對經(jīng)過含三種不同濃度靚精的成熟培養(yǎng)液培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞和空白對照組的卵母細(xì)胞進行孤雌，比較卵裂率和囊胚率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵母細(xì)胞成熟期間添加不同濃度的靚精不會影響卵母細(xì)胞孤雌后的胚胎發(fā)育能力，隨后又通過囊胚TUNEL凋亡染色，發(fā)現(xiàn)囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡

3、細(xì)胞數(shù)在四組間也沒有顯著差異，進一步說明卵母細(xì)胞成熟期間添加靚精不會影響卵母細(xì)胞的后續(xù)胚胎發(fā)育能力。
　　之后在孤雌后的胚胎培養(yǎng)液PZM-3中加入相同的三種濃度的靚精，培養(yǎng)4h后全部換至正常胚胎培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，與空白對照組比較卵裂率、囊胚率以及染色后計算出的囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示卵裂率、囊胚率、囊胚總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)在四組間都沒有顯著差異，說明胚胎在發(fā)育期間接觸這三種濃度的靚精不會影響胚胎的發(fā)育能力。
　　添

4、加相同的三種濃度靚精至精液稀釋液中，使用計算機輔助精液分析系統(tǒng)(CASA)檢測經(jīng)精液稀釋液稀釋后的精液的活率、A級+B級精子比例、直線運動精子活率、精子平均直線運動速度(VSL)、精子平均側(cè)擺幅度(ALH)、精子運動直線性(LIN)、精子運動擺動性(WOB)、精子運動前向性(STR)等指標(biāo)。分析后發(fā)現(xiàn)在30h時0.75％組的直線運動精子活率顯著高于1％組，而與其他兩組間無顯著差異。42 h時0.75％組的精子活率顯著高于對照組，而與0.

5、5％及1％兩組間沒有顯著差異;并且0.75％組的A+B級精子比例顯著高于對照組和0.5％組;而0.75％組的直線運動精子活率顯著高于其他三組。同時通過多因素方差分析和精子各項檢測指標(biāo)隨時間變化的折線圖發(fā)現(xiàn)隨著存儲時間的延長靚精添加濃度為0.75％的精子指標(biāo)如精子活率、A級和B級精子的比例、直線運動精子活率、精子平均直線運動速度(VSL)、精子平均側(cè)擺幅度(ALH)、精子運動直線性(LIN)、精子運動前向性(STR)等的變化幅度都比其他三

6、組的相對應(yīng)指標(biāo)的變化幅度小，綜合這些結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)含0.75％濃度靚精的精液稀釋液對于保存一定時間的精液的效果更佳。
　　使用含0.5％、0.75％和1％三種濃度靚精的精液稀釋液稀釋的精液和正常稀釋液稀釋的精液進行體外受精，發(fā)現(xiàn)無論是卵裂率、囊胚率還是囊胚總細(xì)胞數(shù)、凋亡細(xì)胞數(shù)，在四組間均無顯著差異，這一結(jié)果與精子數(shù)掘結(jié)合說明含0.75％靚精的精液稀釋液能夠維持保存一定時間的精液的運動能力和活率，但是沒有提高體外受精的效果，而對于人工