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1、南昌大學(xué)碩士學(xué)位論文萍鄉(xiāng)紅鯽卵膜糖蛋白ZP3基因的克隆與表達(dá)姓名:吳會(huì)芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):水生生物學(xué)指導(dǎo)教師:洪一江20081206ABSTRACTABSTRACTPingxiangredtransparentcmciancarp,CarassiusauratusvarPingxiangnensisisawildnessnaturaltripledcruciancarpmutantdistributedintheareaofPin
2、gxianginJiangxiProvinceIttakesbisexualandgynogeneticreproductionmodewhichissimilartothesilvercmciancarp。Carassiusauratusgibelio(B10ch)Zonapellucida(ZP)isthemarxglycoproteinextracellulararoundtheperipheraleggsZP3isamember
3、oftheZPfamilyExperimentsshowedthat,ZP3isthereceptorofprimarysperm,anditcouldcombinespermsandleadstoacrosomereactioninmammalsIts01inkedglycosylatedsidechainplaysakeyroleduringspermcombinationThemaincontentofthispaperinclu
4、destwopartsFirst:weclonedtheeDNAsequenceofZP3fromPingxiangredtransparentcmciancarpbyusingSMARTeDNAsynthesisandRACEPCRmethodsThesequenceweobtainedis1278bpIthascomplete3’endincludingterminalcodonTAA,atailingsignalAATAAAand
5、atailwith30bplongpolyAThepartialopenreadingframeofZP3isfrom16bpto1230bpanditencodes404aminoresiduesAnalysisofaminoacidsequencehomologyindicatedthatPingxiangred—transparentcmciancarpshowedthelligllesthomologwithsilvercmci
6、ancarpTIlisresultssuggestedtheymighthaveverycloserelationshipsSecond:ThecorefragmentofclonedeDNAsequencewassubclonedintopET32avectorTherecombinedvectorWastransformedintoBL21(DE3)Ecolicompetentcells。Theywereinducedbyisopr
7、opyl—p—thiogalactopyranoside(IPTG),andthenexpressedafusionprotienThisprotienWaspurifiedwithaffinityresinNiNTA,analysisedthroughSodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis(SDSPAGE)andquantitatedbyBrandfordmethodI
8、nresult,Weobtainedtherelativelypurifiedfusionprotienabout31KDawiththeconcentrationof3588mg/LTIlisresearchCanbeafoundationforpreparationofZP3polyclonalantibodyandfurtherstudyabouttheexpressioncharacteristiesofZP3intheproc
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