熒光標(biāo)記斑馬魚(yú)稚魚(yú)耳石的效果及其對(duì)抗氧化酶活力的影響.pdf

1、隨著水產(chǎn)業(yè)發(fā)展和漁業(yè)資源保護(hù)的需求日益增多,魚(yú)類標(biāo)志技術(shù)也取得了很大進(jìn)步,產(chǎn)生了多種標(biāo)志方法。但這些方法在標(biāo)記仔稚魚(yú)時(shí)存在很多的問(wèn)題和不足,比如需要很長(zhǎng)的時(shí)間或較高的經(jīng)濟(jì)成本,而且每種標(biāo)志方法因標(biāo)記原因、標(biāo)記強(qiáng)度和標(biāo)記鑒定等總有這樣或那樣的缺點(diǎn)與不足。魚(yú)體所受的脅迫和致死率、標(biāo)志成本和勞動(dòng)強(qiáng)度以及標(biāo)志的檢測(cè)和回捕效果等是影響標(biāo)志技術(shù)的重要因素,而用熒光染料浸泡標(biāo)記能夠滿足以上要求,并且可以在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的標(biāo)記放流活動(dòng)。目前國(guó)內(nèi)在研

2、究用熒光物質(zhì)浸泡標(biāo)記水生動(dòng)物時(shí),多注重對(duì)熒光物質(zhì)濃度的選擇,熒光物質(zhì)的浸泡時(shí)間基本都定為24h,而對(duì)不同浸泡時(shí)間對(duì)耳石標(biāo)記效果的影響情況研究較少,尤其是在熒光物質(zhì)浸泡標(biāo)記魚(yú)類時(shí)對(duì)其機(jī)體有無(wú)脅迫、損傷及損傷程度等方面尚未見(jiàn)到有人報(bào)道。本研究選用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)水生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物斑馬魚(yú)為實(shí)驗(yàn)材料,采用鹽酸四環(huán)素和鈣黃綠素浸泡標(biāo)記斑馬魚(yú)稚魚(yú),確定適合標(biāo)記斑馬魚(yú)稚魚(yú)的熒光物質(zhì)以及最佳濃度、浸泡時(shí)間和浸泡方法;通過(guò)連續(xù)監(jiān)測(cè)主要的抗氧化酶活性指標(biāo)——超氧化物歧化

3、酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px),初步評(píng)估鹽酸四環(huán)素浸泡標(biāo)記稚魚(yú)耳石時(shí)對(duì)其機(jī)體產(chǎn)生的脅迫影響,在一定程度上確定該方法的安全程度,旨在探討安全有效的熒光標(biāo)記方法,以期為研究水產(chǎn)動(dòng)物增殖放流標(biāo)記等提供理論依據(jù)和實(shí)際參考。論文主要研究結(jié)果如下:
　　 1.鹽酸四環(huán)素(TCH)適合用于斑馬魚(yú)稚魚(yú)耳石的熒光標(biāo)記,黃色熒光標(biāo)記率高達(dá)100%、標(biāo)記效果良好且持久;在稚魚(yú)的三對(duì)耳石中,以微耳石的熒光標(biāo)記效果

4、最佳、個(gè)體差異性最小,矢耳石其次;檢測(cè)TCH熒光標(biāo)記時(shí)適宜的激發(fā)光源為監(jiān)光I3(BP450-490)和黃綠光N2.1(BP515-560),其中黃綠光N2.1(BP515-560)檢測(cè)效果更佳。
　　 2.鈣黃綠素不適于斑馬魚(yú)稚魚(yú)耳石的熒光標(biāo)記。鈣黃綠素的綠色熒光與稚魚(yú)耳石的自發(fā)熒光顏色相近,不容易區(qū)分,熒光標(biāo)記效果不顯著、標(biāo)記率低;但檢測(cè)鈣黃綠素標(biāo)記效果的適宜激發(fā)光源仍為藍(lán)光I3(BP450-490)和黃綠光N2.1(BP51

5、5-560),三對(duì)耳石中標(biāo)記效果相對(duì)良好的仍是微耳石,矢耳石其次。
　　 3.稚魚(yú)(尤其是小日齡)階段是適于熒光物質(zhì)浸泡標(biāo)記的階段,胚胎時(shí)期的某些階段可能也適合熒光標(biāo)記,但需要從浸泡后胚胎能否正常發(fā)育及出膜后魚(yú)苗質(zhì)量好壞等方面做進(jìn)一步的深入研究。
　　 4.在一定范圍內(nèi),稚魚(yú)對(duì)熒光物質(zhì)的吸收與浸泡液濃度、浸泡持續(xù)時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系;在一定期限內(nèi),同一濃度浸泡處理后,熒光標(biāo)記強(qiáng)度隨稚魚(yú)的生長(zhǎng)而呈現(xiàn)逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)。
　　

6、 5.通過(guò)研究TCH對(duì)稚魚(yú)抗氧化酶活力的影響,能夠得出——在本實(shí)驗(yàn)設(shè)置的濃度范圍內(nèi),TCH對(duì)抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px具有誘導(dǎo)作用;24h浸泡處理下稚魚(yú)的抗氧化酶活力高于18h浸泡處理組,高濃度浸泡時(shí)間為24h時(shí)可能對(duì)稚魚(yú)機(jī)體造成了一定的氧化損傷,但這種損傷經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后能恢復(fù)止常;而中低濃度組浸泡時(shí)間為24h或TCH各濃度組浸泡時(shí)間為18h時(shí),稚魚(yú)機(jī)體的抗氧化酶系統(tǒng)基本能清除脅迫產(chǎn)生的活性氧自由基從而避免機(jī)體受到氧化損傷。