斑馬魚(yú)抗氧化基因gss和gpx1a的表達(dá)模式和功能研究.pdf

1、生物體內(nèi)一定水平的自由基是維持正常生命活動(dòng)所必須的，而機(jī)體氧化與抗氧化失衡則會(huì)造成氧化壓力損傷，產(chǎn)生腫瘤、心腦血管疾病等不同的后果。斑馬魚(yú)是新型的模式動(dòng)物，具有發(fā)育快速、胚胎發(fā)育早期身體透明等優(yōu)點(diǎn)。谷胱甘肽和機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)關(guān)系密切，和谷胱甘肽代謝相關(guān)的酶也會(huì)參與到抗氧化系統(tǒng)中。然而至今關(guān)于斑馬魚(yú)ecs、gss、gst、gpx、gsr等谷胱甘肽代謝相關(guān)酶類(lèi)的表達(dá)模式、功能等方面的研究還比較少，相關(guān)的動(dòng)物模型也比較缺乏。
　　本實(shí)驗(yàn)

2、中，首先，采用 GATEWAY和 iTol2轉(zhuǎn)基因技術(shù)，構(gòu)建 gss：EGFP斑馬魚(yú)轉(zhuǎn)基因模型，并結(jié)合原位雜交技術(shù)，確定gss的表達(dá)模式為在胚胎發(fā)育開(kāi)始即1細(xì)胞時(shí)期就出現(xiàn)較高水平表達(dá)并在整個(gè)胚胎早期發(fā)育為全胚胎表達(dá)，24h出現(xiàn)晶狀體、前腎導(dǎo)管特異性穩(wěn)定表達(dá)，4日齡出現(xiàn)肝臟穩(wěn)定表達(dá)；說(shuō)明gss為胚胎發(fā)育必須基因，在肝臟、腎臟、晶狀體等主要部位通過(guò)合成GSH維持機(jī)體氧化還原環(huán)境的穩(wěn)定。
　　其次，7mM H2O2處理gss-EGFP斑

3、馬魚(yú)模型發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)有上調(diào)現(xiàn)象，提示gss的表達(dá)受到機(jī)體所處氧化還原環(huán)境的調(diào)控，隨氧化壓力的變化而變化；而熒光強(qiáng)度的變化，可以指示機(jī)體內(nèi)氧化還原環(huán)境的變化，預(yù)計(jì)可用于藥物毒性的評(píng)價(jià)及篩選、環(huán)境毒性的評(píng)價(jià)以及基因功能的進(jìn)一步探究。
　　第三，為了得到存活率較低的基因敲除模型，用來(lái)篩選具有抗氧化活性的藥物，采用 CRISPR基因敲除技術(shù)，設(shè)計(jì) gpx1a-gRNA進(jìn)行顯微注射，得到gpx1a-knockout斑馬魚(yú)模型的F0代，為純合