青蝦高多態(tài)性EST-SSR標(biāo)記的篩選及遺傳多樣性的研究.pdf

1、青蝦，學(xué)名日本沼蝦（Macrobrachiumnipponense），是我國重要的淡水養(yǎng)殖蝦類。由于青蝦具有脫殼的生物學(xué)特性，活體標(biāo)記比較困難，而分子標(biāo)記作為以DNA多態(tài)性為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記，已被廣泛應(yīng)用于遺傳多樣性分析、群體與種質(zhì)鑒定、親緣關(guān)系研究、性狀相關(guān)標(biāo)記篩選等方面。微衛(wèi)星標(biāo)記作為第二代分子標(biāo)記由于其具有多態(tài)性好、共顯性遺傳等特點(diǎn)，在遺傳學(xué)和遺傳育種研究中備受青睞。因此在青蝦中篩選適合作為其種質(zhì)資源鑒定的分子標(biāo)記是十分必要的。黃河

2、、長江、珠江三大河流中，青蝦資源較為豐富，調(diào)查分析三個(gè)青蝦群體的遺傳多樣性對(duì)資源保護(hù)和科學(xué)利用都有著重要的意義。
　　本研究通過對(duì)青蝦NCBI-EST文庫（LIBEST_027335oftestiscDNAlibrary;LIBEST_023572ofovarycDNAlibrary）進(jìn)行微衛(wèi)星序列的查找，針對(duì)搜索得到的微衛(wèi)星序列設(shè)計(jì)引物，以太湖野生青蝦群體為模板進(jìn)行擴(kuò)增，按照衡量基因變異程度高低的多態(tài)信息含量指標(biāo)篩選出具有高度多

3、態(tài)性(PIC＞0.5)的14個(gè)EST-SSR標(biāo)記。檢測到的等位基因數(shù)(Na)為4到13;觀察雜合度(Ho)從0.4125到0.8938;期望雜合度(He)從0.6786到0.9332;多態(tài)信息含量(PIC)從0.613到0.899。
　　利用本研究篩選得到的EST-SSR標(biāo)記，并結(jié)合原來實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的微衛(wèi)星標(biāo)記，確定其中的20個(gè)標(biāo)記對(duì)黃河、長江、珠江三大河流的青蝦群體進(jìn)行了遺傳多樣性分析。結(jié)果表明:黃河、長江、珠江三個(gè)青蝦群體等位基

4、因數(shù)(Na)分別為6.5500、5.2500、5.7000;20個(gè)位點(diǎn)平均多態(tài)信息含量(PIC)為0.7876;3個(gè)群體觀測雜合度(Ho)分別為0.4481、0.5013、0.4127;3個(gè)群體期望雜合度(He)分別為0.5210、0.5536、0.6529，表明三條河流青蝦遺傳多樣性都較為豐富;期望雜合度由高到低依次為:珠江、長江、黃河。分子方差分析(AMOVA)結(jié)果顯示，青蝦3個(gè)群體間5.3％遺傳變異來自群體間，94.7％來自群體內(nèi)

5、，兩兩群體間Fst值在0.0298-0.0552之間，表明群體間已明顯出現(xiàn)分化(P＜0.05)，但分化程度中等。3個(gè)群體間的遺傳相似系數(shù)為0.8162到0.9143之間;3個(gè)群體間遺傳距離在0.0898-0.1530之間，其中黃河與珠江群體遺傳距離較遠(yuǎn)為0.1530，珠江與長江群體遺傳距離最近為0.0898。黃河與長江群體遺傳距離為0.1028。
　　本文篩選了高度多態(tài)性的青蝦微衛(wèi)星位點(diǎn)，為青蝦提供了新的分子標(biāo)記;對(duì)黃河、長江、珠