綿羊MIR-148b和MIR-320對毛囊發(fā)育調(diào)控研究.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs)是一類能夠?qū)蜻M(jìn)行廣泛調(diào)節(jié)的非編碼微小RNA，存在于真核生物體內(nèi)。已有研究表明它們能夠參與腫瘤形成、心臟發(fā)育、脂肪代謝、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和細(xì)胞的增殖分化等過程。此外有證據(jù)表明miRNA會影響毛囊的發(fā)育和生長周期。本課題組前期利用Solexa測序檢測了藏綿羊毛囊發(fā)育不同時(shí)期（休止期、生長期和衰退期）miRNAs的表達(dá)情況，試圖篩選出對毛囊發(fā)育過程有重要作用的miRNAs。測序結(jié)果表明毛囊從休止期到生長期的發(fā)

2、育過程中，miR-148b和miR-320屬于上調(diào)表達(dá)倍數(shù)最高的一類miRNAs。為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述miRNA在毛囊發(fā)育過程中的具體作用及作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)以人毛乳頭細(xì)胞和人毛母質(zhì)細(xì)胞為材料，在體外研究了miR-148b和miR-320對其增殖情況的影響，推斷了miR-148b和miR-320在毛囊發(fā)育過程中的作用以及它們發(fā)揮作用可能涉及的信號通路。獲得結(jié)果如下:
　　(1)Q-PCR的結(jié)果說明毛囊生長期miR-148b和miR-3

3、20的表達(dá)水平顯著高于休止期的表達(dá)情況，這與前期的測序結(jié)果相符。
　　(2)miR-148b可促進(jìn)人毛乳頭細(xì)胞和人毛母質(zhì)細(xì)胞的增殖，miR-320對人毛乳頭細(xì)胞和人毛母質(zhì)細(xì)胞的增殖有抑制作用。用miRNAminicis轉(zhuǎn)染人毛乳頭細(xì)胞和人毛母質(zhì)細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，超表達(dá)miR-148b后利用Edu檢測的增殖細(xì)胞比例顯著高于對照組的(P＜0.05);而超表達(dá)miR-320后Edu檢測的增殖細(xì)胞比例顯著低于對照組的(P＜0.05)。另用xCE

4、LLigence系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)控系統(tǒng)檢測證實(shí)超表達(dá)miR-148b后人毛乳頭細(xì)胞的增殖速度顯著高于對照組。
　　(3)miR-148b能顯著提高Wnt信號通路的活性。TOPFlash/FOPFlash熒光素酶報(bào)告基因檢測結(jié)果表明miR-148b能顯著提高TOPFlash報(bào)告基因的熒光信號強(qiáng)度(P＜0.05)。
　　(4)超表達(dá)miR-148b能提高Wnt信號通路下游轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平，而miR-320會降低它們的表達(dá)水平。在人毛

5、乳頭細(xì)胞中超表達(dá)miR-148b和miR-320后檢測β-catenin、cycD、c-jun和PPARD的mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果表明相比于對照組，轉(zhuǎn)染miR-148bminics能提高上述基因的表達(dá)情況，而轉(zhuǎn)染miR-320minics則會降低上述基因的表達(dá)情況。
　　(5)miR-148b可能會靶作用于SMAD2、CAMK2A、NFAT5和Wnt10b來發(fā)揮對Wnt信號通路的調(diào)控作用。我們利用Targetscan對miR-1