水稻OsPP6C基因過表達及干擾的研究.pdf

1、隨著生產(chǎn)水平的日益提高,水稻不僅被作為重要的糧食作物,還被作為經(jīng)濟作物和飼料作物,具有巨大的開發(fā)利用價值,因此,它對我們的生活和生產(chǎn)越來越重要。盡管近幾年水稻的產(chǎn)量和品質(zhì)都有所提高,但是仍然受到許多不利條件的影響。當(dāng)前,進一步培育新的水稻品種才是我國農(nóng)業(yè)科技發(fā)展的重要工作,利用分子生物學(xué)技術(shù)和植物基因工程方法,成為解決此項工作的新的有效手段。
　　在細(xì)胞中,有限的蛋白磷酸酶和很多蛋白激酶共同維持著蛋白磷酸化的穩(wěn)態(tài)。蛋白絲氨酸/蘇氨

2、酸磷酸酶(簡稱PSPs)可分為磷蛋白磷酸酶(簡稱PPPs)、金屬依賴的蛋白磷酸酶(簡稱PPMs,其中PP2C是PPM的一種)和基于天冬氨酸的磷酸酶[例如FCP(RNA聚合酶II CTD磷酸酶的TFIIF關(guān)聯(lián)組分)和SCP(小的CTD磷酸酶)]三個家族。而PPP又包括一型(PP1)、二型(PP2A、PP2B)、新型(PP4、PP5、PP6、PP7)磷酸酶。
　　RNA干擾是通過雙鏈 RNA的介導(dǎo),特異性地降解相應(yīng)序列的 mRNA,從

3、而阻斷相應(yīng)基因表達的轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默機制。大部分RNA干擾重組載體的組成是由一個被空白序列所隔斷的反向重復(fù)序列組成。另外,這個空白序列要求是一個穩(wěn)定的復(fù)制子,能夠在大腸桿菌 RNAi質(zhì)粒中穩(wěn)定遺傳,它可以是β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因、綠色熒光蛋白(GFP)基因和許多內(nèi)含子中的一種。然而,許多研究表明空白序列是內(nèi)含子對基因的沉默的效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于GUS基因和GFP基因。
　　蛋白磷酸酶6(protein phosphatase6

4、, PP6)在模式植物擬南芥(Arabidopsis thaliana)中已經(jīng)被證實參與了生長素和脫落酸信號轉(zhuǎn)導(dǎo),并且還在擬南芥衰老進程扮演了重要角色,但在其他植物中則鮮有報道。為研究和分析水稻蛋白磷酸酶6(Oryza sativa protein phosphatase6,簡稱PP6)的功能,本文采用RT-PCR技術(shù)從水稻中花11葉片cDNA中擴增OsPP6C基因全長,構(gòu)建了水稻蛋白磷酸酶6催化亞基(Oryza sativa prot

5、ein phosphatase6 catalytic subunit,OsPP6C)基因的過表達載體并構(gòu)建與GUS融合的pBI121-OsPP6C-GUS過表達載體,同時,構(gòu)建了OsPP6CRNAi表達載體。結(jié)果克隆了水稻蛋白磷酸酶6催化亞基基因OsPP6CRNAi片段和基因全長片段,并將OsPP6C基因連接在植物PBI121載體上和被一段內(nèi)含子所隔斷的反向重復(fù)序列連接到pCambia2300載體上,成功構(gòu)建了蛋白磷酸酶6催化亞基基因的