GATA-6過表達(dá)和干擾載體的構(gòu)建及其對(duì)鵝顆粒細(xì)胞類固醇合成及相關(guān)基因的調(diào)控研究.pdf

1、GATA家族是能與靶基因核酸的共同序列（A/T）GATA(A/G)相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子，其核心成員GATA-4和GATA-6主要表達(dá)于動(dòng)物卵巢顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞中，GATA-4和GATA-6被證實(shí)在人、小鼠以及豬的卵巢中均共同參與調(diào)控類固醇激素的合成過程。目前對(duì)GATA-4調(diào)控卵巢顆粒細(xì)胞類固醇激素合成的機(jī)理已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究，但GATA-6在鵝以及其他物種卵巢中的功能研究卻還沒有報(bào)道。因此，本研究以天府肉鵝母系為實(shí)驗(yàn)材料，首先構(gòu)建鵝GAT

2、A-6干擾載體和過表達(dá)載體;其次通過干擾和過表達(dá)GATA-6基因，分析其對(duì)顆粒細(xì)胞類固醇合成及相關(guān)基因的調(diào)控作用;最后通過共轉(zhuǎn)染GATA-4和GATA-6過表達(dá)載體，探討兩者在顆粒細(xì)胞中的作用差異及可能的相互作用關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過RT-PCR、克隆測(cè)序以及序列拼接獲得天府肉鵝GATA-6基因完整編碼區(qū)序列1173bp，預(yù)測(cè)其共編碼390個(gè)氨基酸，序列提交至NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)，其登陸號(hào)為:KP723851。

3、　　(2) CCK結(jié)果表明:過表達(dá)GATA-6基因后，鵝卵巢顆粒細(xì)胞增殖率上升;而干擾.GATA-6基因表達(dá)后，顆粒細(xì)胞增殖率下降;由此表明GATA-6能夠正向調(diào)控顆粒細(xì)胞增殖。
　　(3)與空白組及空載組相比，干擾GATA-6基因表達(dá)后，膽固醇和孕酮的分泌量顯著增加(p＜0.05)，而其下游靶基因3β-HSD、Cyp17、P450scc、17β-HSD表達(dá)量顯著降低(p＜0.05)，Cyp19、StAR顯著上升(p＜0.05)，

4、而FSHR無明顯變化(p＞0.05)。故表明3β-HSD、Cyp19、 Cyp17、P450scc、17β-HSD、StAR是GA TA-6在卵泡發(fā)育過程中參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄的下游靶基因，并通過調(diào)控相關(guān)靶基因轉(zhuǎn)錄間接調(diào)節(jié)類固醇激素的合成。
　　(4)與空白組及空載組相比，過表達(dá)GATA-6基因后，孕酮分泌量增加(p＞0.05)，膽固醇分泌量降低(p＞0.05)，睪酮分泌量極顯著減少(p＜0.01);而其下游靶基因3β-HSD和Cyp19

5、以及FSHR的表達(dá)量極顯著下降(p＜0.01)，17β-HSD顯著下降(p＜0.05)，Cyp17和StAR的表達(dá)量極顯著上升(p＜0.01)，P450scc的表達(dá)量雖然呈上升趨勢(shì)但是差異不顯著(p＞0.05)。此外，GATA-4基因表達(dá)量無顯著性的變化，所有空白組和對(duì)照組之間沒有顯著的變化(p＞0.05)。比較干擾和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，表明GATA-6對(duì)于調(diào)控下游靶基因存在差異性的調(diào)控模式;而轉(zhuǎn)錄因子GATA-6對(duì)轉(zhuǎn)錄因子GATA-4的

6、表達(dá)量的影響沒有差異性的影響。
　　(5)與空白組以及對(duì)照組相比，共轉(zhuǎn)染GATA-4和GATA-6真核表達(dá)載體后，膽固醇的分泌量顯著增加(p＜0.05)，孕酮分泌量增加但差異不明顯(p＞0.05)，睪酮分泌量顯著減少(p＜0.05)。而下游靶基因3β-HSD、Cyp19以及FSHR的表達(dá)量顯著升高(p＜0.05)，17β-HSD雖然表達(dá)量上升但差異不顯著(p＞0.05)，Cyp17和P450scc表達(dá)量極顯著降低(p＜0.01)，