病毒VdCV1的OTU基因?qū)χ参锊《镜挠绊懠稗D(zhuǎn)基因黃萎菌的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)室從棉花黃萎菌中發(fā)現(xiàn)了真菌病毒Verticilliumdahliaechrysovirus1(VdCV1)，推測其中包含OvarianTumorprotease(OTU蛋白酶)基因，但對OTU基因功能尚未做實(shí)驗(yàn)證實(shí)。為此，本文開展VdCV1的OTU基因?qū)χ参锊《镜挠绊懠稗D(zhuǎn)基因黃萎菌研究，以期探明OTU基因在VdCV1-黃萎菌-棉花互作中的功能。
　　在VdCV1的OTU基因表達(dá)對植物病毒的影響研究方面，通過將OTU基因插入到

2、狗尾草花葉病毒(Foxtailmosaicvirus，F(xiàn)oMV)及黃瓜花葉病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）F209-Δ2b中，構(gòu)建OTU基因的病毒表達(dá)載體pCB301-FoMV-OTUp193、pCB301-F209-Δ2b-OTUp193，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室已有對照載體及pCB301-F209-Δ2b-GFP、pCB301-FoMV-GFP，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)農(nóng)桿菌浸潤本生煙，分析OTU基因表達(dá)對FoMV病毒復(fù)制酶RdRp的RNA

3、量的影響，分析OTU基因表達(dá)對重組病毒pCB301-FoMV-GFP、重組病毒CMV的GFP表達(dá)的影響，從而分析OTU基因?qū)Σ《镜淖饔?。研究結(jié)果:Northern雜交分析表明，OTU基因?qū)Σ《綟oMV的RdRp具有增強(qiáng)穩(wěn)定性的作用;熒光檢測及Western雜交分析表明，OTU基因表達(dá)對重組病毒pCB301-FoMV-GFP的GFP熒光表達(dá)具有增強(qiáng)作用，并對重組病毒CMV(F209-Δ2b-GFP，F(xiàn)109，F(xiàn)309)的GFP熒光表達(dá)也具

4、有增強(qiáng)作用，證明了OTU基因?qū)Σ《緩?fù)制的增強(qiáng)作用。另外，通過Northern雜交實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果表明，OTU基因表達(dá)降低植物病程相關(guān)基因NtPR1a表達(dá)量，表明OTU基因表達(dá)降低植物的免疫力。
　　在轉(zhuǎn)基因黃萎菌研究方面，我們將OTU基因和小片段基因OTUp193替代載體pHMG中以Pmg1基因?yàn)閱幼拥腉FP基因，構(gòu)建OTU基因的真菌表達(dá)載體pHMG-OTU和pHMG-OTUp193，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(ATM)將質(zhì)粒pHMG、pHM