葡萄胎的分子遺傳學(xué)分析及基因NLRP7和KHDL3C的致病性研究.pdf

1、學(xué)校代碼：10023學(xué)號：200601044葡萄胎的分子遺傳學(xué)分析及基因NLRP7和K助L3C的致病性研究專業(yè)年級：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2006級姓名：計(jì)鳴良導(dǎo)師：向陽(教授)趙峻(副教授)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院(北京協(xié)和醫(yī)院)婦產(chǎn)科完成日期：2014年6月摘要背景葡萄胎是一種良性滋養(yǎng)細(xì)胞疾病，其特征為絨毛水腫變性和滋養(yǎng)細(xì)胞增生。根據(jù)其組織病理學(xué)表現(xiàn)，葡萄胎包括完全性葡萄胎(completehydatidifommole，Cm訂)

2、和部分性葡萄胎(阿ialhydatidifonllmole，P陽Ⅵ)兩類。C玎vI常為孤雄二倍體(鋤drogeneticCⅡ訂，AnCⅡ訂)，但近來發(fā)現(xiàn)了雙親來源的完全性葡萄胎(bip猢1talC玎Ⅵ，BiC刪)，這種特殊類型多見于家族性復(fù)發(fā)性葡萄胎(觚iIialrecurrenthydatidifommole，F(xiàn)RⅡvI)，偶可見于散發(fā)的復(fù)發(fā)性葡萄胎(rec哪nthydatidi南冊mole，I瑚M)。FIⅢM是一種罕見的疾病，可能為

3、常染色體隱性遺傳病，患者多有印記基因異常，并有NLRP7和K玎DC3L不同位點(diǎn)的純合突變。目的本研究擬通過短串聯(lián)重復(fù)序列(shortt鋤demrepeat，STR)多態(tài)性檢測對FR皿Ⅵ、R州和散發(fā)性葡萄胎及其雙親進(jìn)行遺傳學(xué)分析，確定葡萄胎的遺傳學(xué)起源，研究FIⅢM是否與BiC叮訂存在相關(guān)性。并對BiC玎Ⅵ患者的NLRP7和KHDC3L基因編碼序列進(jìn)行測序，以AnC玎訂患者為對照，尋找上述基因編碼序列的變異位點(diǎn)，并結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索的一般人群

4、資料，探討所發(fā)現(xiàn)位點(diǎn)的致病性。材料收集1個(gè)F刪家系、5個(gè)IⅢM家系和6個(gè)散發(fā)性葡萄胎病例的臨床資料，并收集葡萄胎組織新鮮清宮標(biāo)本或蠟塊標(biāo)本及其切片，采集患者及其丈夫和母親、姐妹的外周血。分別提取葡萄胎組織和外周血DNA。方法一、復(fù)核葡萄胎病理標(biāo)本HE染色和p57唧免疫組化染色切片，再次明確葡萄胎診斷，并區(qū)分CHM和PHM。二、選取人不同染色體上用于多態(tài)性檢測的STR位點(diǎn)，使用帶有熒光標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)引物分別對上述DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使用聚丙

5、烯氨酰胺凝膠電泳或DNA測序儀對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行長度片段檢測，并按葡萄胎及其雙親為單位進(jìn)行分組分析，從而確定葡萄胎的遺傳學(xué)起源。三、根據(jù)基因NLI沖7和K玎DC3L的編碼區(qū)參考序列，分別設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增葡萄胎患者及其母親或姐妹這兩個(gè)基因的所有外顯子，并使用DNA測序儀對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序。將測序結(jié)果與參考序列進(jìn)行比較，找出可改變表達(dá)產(chǎn)物氨基酸序列的突變或非同義異形體(nonsynonymousvariant，NSV)。在dbSNP和emsembl