稻瘟病抗性相關(guān)基因OsOGCP、OsDXR和OsRPA3a的克隆與功能初步分析.pdf

1、水稻是世界上重要的糧食作物之一。發(fā)掘抗病基因，培育持久抗病的水稻新品種始終是一大研究熱點。本論文在粳稻云引受稻瘟病菌誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)分析基礎(chǔ)上，篩選出可能與水稻稻瘟病抗性相關(guān)的3個基因，分別是：
　?。?）編碼線粒體載體蛋白的AK068090（暫時命名為OsOGCP）；
　?。?）編碼1-脫氧-D-木酮糖5-磷酸鹽還原異構(gòu)酶的AF367205（暫時命名為OsDXR）；
　?。?）編碼含OB-fold結(jié)構(gòu)域的核酸結(jié)合蛋

2、白的AK070400（暫時命名為OsRPA3a）。為了進(jìn)一步確定這3個基因的功能，我們選用廣譜抗稻瘟病品種云引和普感品種麗江新團(tuán)黑谷（LTH）為材料，分別從云引和LTH中克隆了這3個基因并進(jìn)行初步功能分析。主要研究結(jié)果如下：
　　1.分別以云引和麗江新團(tuán)黑谷葉片的cDNA為模板，擴(kuò)增3個目的基因的CDS和啟動子序列。序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn)基因OsOGCP、OsDXR和OsRPA3a的CDS序列以及基因OsRPA3a的啟動子序列各自在云引

3、和麗江新團(tuán)黑谷兩個品種中完全一致，而且與NCBI中登錄的序列相同；基因OsOGCP和OsDXR的啟動子序列在云引和麗江新團(tuán)黑谷兩個品種中同源性分別為95.98％和98.78%。
　　2.利用RACE技術(shù)分別獲得3個目的基因的cDNA全長序列，然后利用MEGA5.1分別構(gòu)建相應(yīng)基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹，初步分析和預(yù)測這3個基因可能具有的功能，其中OsOGCP基因與禾本科黍?qū)倬幋aα-酮戊二酸載體蛋白的基因親緣關(guān)系較近，且位于同一分支上；OsD

4、XR基因與姜屬編碼1-脫氧-D-木酮糖5-磷酸還原異構(gòu)酶的基因有較近的親緣關(guān)系；OsRPA3a基因與玉米屬中編碼逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子蛋白的基因親緣關(guān)系較近。
　　3.通過實時熒光定量PCR技術(shù)分析這3個目的基因在受稻瘟病菌誘導(dǎo)后不同時間段的表達(dá)情況。結(jié)果表明，隨著接種稻瘟病菌時間的推移，3個基因的表達(dá)量也發(fā)生相應(yīng)的變化，說明這3個基因的表達(dá)受稻瘟病菌誘導(dǎo)。
　　4.分別構(gòu)建了這3個目的基因的植物過表達(dá)載體、RNAi干擾表達(dá)載體和植物