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文檔簡介
1、Pib是利用圖位克隆技術(shù)從水稻克隆出來的第一個抗稻瘟病主效基因。由于Pib基因來自基因組文庫，其DNA序列保持了該基因在原基因組中的自然狀態(tài)。這為從分子水平研究稻瘟病抗性基因分子結(jié)構(gòu)與抗稻瘟病功能之間的相互關(guān)系提供了材料。 首先采用DNAman軟件對全長Pib基因序列進行酶切位點分析。 其次根據(jù)Pib基因的結(jié)構(gòu)特點，將Pib結(jié)構(gòu)基因克隆進雙元載體構(gòu)建了5個植物表達載體pNAR501、pNAR502、pNAR503等，
2、這5個載體分別由35S驅(qū)動。pNAR501攜帶Pib結(jié)構(gòu)基因的外顯子2-外顯子3，pNAR502攜帶5’端部分缺失外顯子1，pNAR503攜帶5’端部分缺失的外顯子1-外顯子2-外顯子3的3個不同基因組片段等。 再次用農(nóng)桿菌介導法獲得了上述表達載體的水稻品種日本晴轉(zhuǎn)基因植株30株。 隨后經(jīng)PCR、Southern和后代潮霉素抗性分離檢測確證外源基因已整合進水稻基因組。 最后進行T<,0>代和T<,0>代轉(zhuǎn)基
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