檸檬烯對(duì)指狀青霉孢子萌發(fā)的作用初探.pdf

1、由指狀青霉（Penicillium digitatumSacc）侵染柑橘引起的綠霉病是最嚴(yán)重的柑橘類采后病害，最高可引起90％的采后腐爛損失。在柑橘綠霉病害發(fā)生過(guò)程中，油胞受損后釋放的檸檬烯起到了重要作用，但是具體的作用機(jī)制還不清楚。本研究以指狀青霉孢子為研究對(duì)象，研究了離體和活體條件下檸檬烯對(duì)指狀青霉生長(zhǎng)的影響，并分析了外源檸檬烯的流向。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　（1）測(cè)定了不同數(shù)量級(jí)（104個(gè)/mL、105個(gè)/mL、106個(gè)/m

2、L、107個(gè)/mL）的指狀青霉孢子濃度和OD值之間的關(guān)系，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，在不同的數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)，其線性關(guān)系良好，可以作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確定量孢子濃度的依據(jù)。
　?。?）測(cè)定了水瓊脂培養(yǎng)基中添加檸檬烯后對(duì)不同濃度孢子萌發(fā)率的影響。結(jié)果表明：孢子濃度為106個(gè)/mL和107個(gè)/mL時(shí)，檸檬烯在低濃度下（0-0.50μL/mL）促進(jìn)孢子萌發(fā)，高濃度（>1.0μL/mL）下抑制其萌發(fā)，最大促進(jìn)濃度分別為0.25μL/mL和0.50μL/mL。<

3、br>　?。?）測(cè)定了液體培養(yǎng)基（PDB）中添加檸檬烯后對(duì)不同濃度孢子萌發(fā)率的影響以及萌發(fā)率隨時(shí)間的變化。結(jié)果表明：孢子濃度為106個(gè)/mL和107個(gè)/mL時(shí)，檸檬烯在低濃度下（0-0.50μL/mL）促進(jìn)孢子萌發(fā)，高濃度（>1.0μL/mL）下抑制其萌發(fā)，最大促進(jìn)濃度分別為0.25μL/mL和0.50μL/mL。研究還發(fā)現(xiàn)，孢子萌發(fā)率隨時(shí)間而增加，11 h后萌發(fā)完全。
　?。?）探討了外源添加檸檬烯對(duì)柑橘綠霉病進(jìn)程的影響。結(jié)果表

4、明：自然采摘的柑橘果實(shí)在劃破傷口后第4d開(kāi)始腐爛，第6d達(dá)到98.9％，而沒(méi)有劃破傷口的柑橘以及消毒后的柑橘始終沒(méi)有出現(xiàn)腐爛現(xiàn)象；柑橘油胞傷口上接種指狀青霉孢子并分別培養(yǎng)48h、60h和72h后，柑橘的腐爛直徑分別為2.12cm、3.34cm和6.64cm，顯著高于劃破油胞間隙后的腐爛直徑，分別為1.16cm、1.58cm和4.71cm；在劃破油胞的柑橘果實(shí)上添加5μL0.25-2.0μL/mL的檸檬烯能加速綠霉病的發(fā)病過(guò)程，誘導(dǎo)菌斑生

5、長(zhǎng)，濃度增加至4.0μL/mL時(shí)又抑制其發(fā)??；在劃破油胞間隙的柑橘果實(shí)上添加5μL0.25-4.0μL/mL的檸檬烯能加速綠霉病的發(fā)病過(guò)程，誘導(dǎo)菌斑生長(zhǎng)，濃度增加為4.0μL/mL時(shí)誘導(dǎo)作用開(kāi)始減弱；隨著油胞傷口和油胞間隙傷口添加檸檬烯的濃度增大，兩者腐爛直徑的差異逐漸縮小，當(dāng)檸檬烯濃度為2.0μL/mL時(shí)，腐爛直徑達(dá)到最大分別為4.95cm和4.98cm，兩者無(wú)顯著差異。
　?。?）定性分析了檸檬烯在影響孢子萌發(fā)過(guò)程中的物質(zhì)變化

6、。結(jié)果表明：低濃度下（0-0.50μL/mL）檸檬烯不會(huì)轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，高濃度下(>1.0μL/mL)有少量轉(zhuǎn)化為α-松油醇。
　　（6）定量分析了檸檬烯促進(jìn)孢子萌發(fā)過(guò)程中孢內(nèi)孢外檸檬烯濃度隨檸檬烯初始添加量的變化。結(jié)果表明：孢子濃度為106個(gè)/mL時(shí)，檸檬烯濃度達(dá)到0.50μL/mL后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。孢子濃度為107個(gè)/mL時(shí)，檸檬烯濃度達(dá)到1.0μL/mL后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。兩種孢子濃度下，孢內(nèi)和孢外檸檬烯濃

7、度之和與初始添加的檸檬烯濃度分別無(wú)顯著差異。
　?。?）定量分析了0.25μL/mL檸檬烯促進(jìn)孢子萌發(fā)過(guò)程中孢內(nèi)孢外檸檬烯濃度隨培養(yǎng)時(shí)間的變化。結(jié)果表明：孢子濃度為106個(gè)/mL時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到11h后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。孢子濃度為107個(gè)/mL時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到7h后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。兩種孢子濃度下，孢內(nèi)和孢外檸檬烯濃度之和與初始添加的檸檬烯濃度分別無(wú)明顯差異。
　　本課題證實(shí)了一定濃度檸檬烯可以促進(jìn)指狀青霉孢