圈卷產(chǎn)色鏈霉菌尼可霉素生物合成相關(guān)基因的研究.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文圈卷產(chǎn)色鏈霉菌尼可霉素生物合成相關(guān)基因的研究姓名：曾洪梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：李季倫譚華榮2002.4.1中回衣業(yè)夫?qū)W博士學(xué)位論丈(20021Itlg產(chǎn)色鏈霉菌璺可寰絲金些塑墨墨墮塑竺墨采Hj常規(guī)轉(zhuǎn)化方法用來自天藍(lán)色鏈霉菌兒501的質(zhì)粒pUCll69(DMT660：：Tn4556：：vph)多次轉(zhuǎn)化尼可霉素產(chǎn)生菌圈卷產(chǎn)色鏈霉菌野生型7loonq原qi質(zhì)體，均未得到轉(zhuǎn)化子。采用限制性熱衰減法于5

2、0。C，30min溶菌制備7100的原生質(zhì)體，獲得了轉(zhuǎn)化子，但轉(zhuǎn)化頻率極低，只有04個(gè)轉(zhuǎn)化子／lagDNA。川來自7j00的pUCll69再轉(zhuǎn)化不含pUCll69的7】00原生質(zhì)體，轉(zhuǎn)化頻率提l島103～104倍。于39。C，MM／Vio條件下培養(yǎng)攜帶有pUCll69的7100孢子，Tn4560發(fā)生轉(zhuǎn)座；篩選到4068個(gè)轉(zhuǎn)座菌落，并從中得到8株尼可霉素阻斷突變株：對(duì)這8株突變株的總DNA進(jìn)行Southern雜交分析表明，Tn4560至少

3、在4個(gè)不同的位點(diǎn)插入到7100的染色體上。用實(shí)驗(yàn)室已獲得的與尼可霉素生物合成有關(guān)的覆蓋30kb的4段DNA片段為探針和經(jīng)不同酶切的8株突變株的總DNA進(jìn)行Southern雜交，結(jié)果表明，除阻斷突變株Nik5有雜交信號(hào)且雜交信號(hào)大小均同野生型7100外，其余7株突變株均無任何雜交信號(hào)。HPLC分析表明，8株突變株在產(chǎn)生尼可霉素方面可分為兩種類型，Nik5為1種類型，其余7株為另一種類型。初步推測(cè)這7株突變株基因組DNA與尼可霉素生物合成有