吸水鏈霉菌5008中井岡霉素生物合成基因簇的克隆.pdf

1、井岡霉素由吸水鏈霉菌5008產(chǎn)生,它與吸水鏈霉菌檸檬變種產(chǎn)生的有效霉素具有一致的化學(xué)結(jié)構(gòu).以來自平面放線菌（Actinoplanes sp.50/110）的參與氨基糖苷類抗生素Acarbose生物合成的acbc基因為探針,通過Southern原位雜交,從吸水鏈霉菌5008的基因組文庫中釣取了6個陽性柯斯質(zhì)粒.酶切分析發(fā)現(xiàn)它們相互重疊,并且覆蓋了染色體上近60kb的區(qū)域.利用其中一個柯斯質(zhì)粒構(gòu)建了基因置換載體pHZ2236,成功地以aac

2、（3）IV置換了這一區(qū)域中30kb的染色體片段,并從分子水平上驗證了置換的發(fā)生.對基因置換菌株進行生物活性測定及HPLC分析發(fā)現(xiàn)該基因突變菌株已喪失了合成井岡霉素的能力.進一步對這30kb染色體區(qū)域的測序發(fā)現(xiàn)17個開放閱讀框（ORF）,通過與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的比較分析推測了它們可能的功能,其中大部分基因可能參與了糖基的合成與修飾,包括jjnA(可能負(fù)責(zé)合成2-表-5-表-有效醇酮)、jjnB（可能參與ADP-葡萄糖的合成）、jjnCEFJK

3、（可能與糖基修飾有關(guān),包括氧化、還原和氨化）、jjnG（可能負(fù)責(zé)ADP-葡萄糖與二糖單位有效氧胺的縮合）以及jjnI（可能分解淀粉生成葡萄糖）,其它基因有的可能負(fù)責(zé)井霉素的分泌,如jjnH;有可能對整個基因簇具有調(diào)節(jié)功能,如jjnLM;還有的其生物學(xué)功能以及同井岡霉素生物合成的關(guān)系目前還不清楚,如jjnDNOPQ.歸納這些數(shù)據(jù)并結(jié)合國際上已發(fā)表的可能有效霉生物合成途徑,推測了可能的井岡霉素生物合成途徑.發(fā)展了以pOJ446為載體的新的吸